Allergen-Tests

Wir leben in einer Umgebung, die buchstäblich mit einer Vielzahl von Allergenen gefüllt ist, und es ist schwierig, diejenige zu isolieren, die eine pathologische Reaktion verursacht. Allergische Tests und Labortests zum Nachweis von Substanzen, die an der Bildung einer allergischen Reaktion beteiligt sind, kommen im Blut zur Rettung.

Allergietests sind ein Versuch, die Immunreaktion durch Verabreichung minimaler Dosen des beabsichtigten Allergens nachzuahmen. Proben werden im Zeitraum der Remission (Verbesserung) und nicht früher als 2-3 Wochen nach einer akuten allergischen Reaktion durchgeführt. Alle allergischen Diagnosetests sind in zwei Gruppen unterteilt: Haut und Provokation.

Hauttests

Die Haut enthält eine Vielzahl von Mastzellen, die schnell auf die Einführung eines Allergens reagieren, indem sie Entzündungsmediatoren freisetzen - biologisch aktive Substanzen, die eine lokale, leicht visuell zu beurteilende Entzündungsreaktion verursachen.

Je nach Ausführung werden folgende Arten von Hautallergietests unterschieden:

  • Anwendung: Auf einer Haut, die nicht an einer allergischen Läsion beteiligt ist, wird ein mit einer Allergenlösung angefeuchtetes Gazestück aufgebracht und mit Klebeband fixiert. Das Ergebnis wird nach 20 Minuten ausgewertet (eine Sofortreaktion wird festgestellt), dann nach 5 bis 6 Stunden (maximale Manifestationen während dieses Zeitraums sind charakteristisch für einen allergischen Typ des Immunkomplextyps) und nach 1 bis 2 Tagen (verzögerte Reaktion).
  • Narbenbildung: Tropfen verschiedener Allergene werden auf die Haut im Unterarmbereich aufgetragen, dann durch einen Tropfen mit einem Vertikutierer die Oberflächenseite der Haut leicht zerkratzen und versuchen, die Blutgefäße nicht zu beschädigen. Dieser Test zeigt das Vorhandensein nur anaphylaktischer Reaktionen (Typ I). Das Testergebnis wird in 12-18 Minuten ausgewertet. Eine Variante des Skarifikationstests ist ein weit verbreiteter Stichtest: Durchstechen der oberen Hautschicht mit einer Nadel durch einen Tropfen Allergen.
  • Intradermal: Ein Allergen wird durch intradermale Injektion verabreicht. Diese Proben sind empfindlicher, können jedoch allgemeine allergische Reaktionen verursachen. Wird am häufigsten zur Bestimmung von Allergien gegen Infektionserreger (Bakterien, Pilze) verwendet. Intradermale Tests zeigen allergische Reaktionen vom verzögerten Typ.
Lesen Sie mehr über Hauttests.

Reaktion Prausnitsa-Kyustner

Dieser Test unterscheidet sich etwas von der Reihe der Hauttests, da es sich um eine indirekte Reaktion handelt. Dem Patienten wird kein Allergen injiziert, und das gesunde Serum des Patienten wird intrakutan injiziert. Anschließend wird das Allergen an der Injektionsstelle appliziert. Das Auftreten der Reaktion zeigt das Vorhandensein von Antikörpern im Serum gegen das untersuchte Antigen an. In der modernen Praxis wird diese Probe meistens wegen der Möglichkeit der Übertragung von Erregern bestimmter Infektionen abgelehnt.

Provokative Tests

Wenn die Ergebnisse von Hauttests nicht mit den Daten der Anamnese übereinstimmen, greifen sie auf provokante Tests zurück, die die allergische Reaktion direkt im Zielorgan der Allergie reproduzieren. Folgende Arten provozierender Proben werden unterschieden:

  • Konjunktival: Instillation einer Lösung des mutmaßlichen Antigens in den Augen;
  • Nasal: Ein Allergen wird auf die Schleimhaut der Nasenhöhle aufgetragen;
  • Inhalation: eine Studie zur Reaktion auf die Inhalation eines Allergens;
  • Kalt und thermisch: eine Untersuchung der Reaktion auf die Auswirkungen von hohen und tiefen Temperaturen;
  • Exposition: Modellierung des Kontakts des Patienten mit dem Allergen in der natürlichen Umgebung;
  • Beseitigung: Das Gegenteil von dem vorherigen ist, den Kontakt des Patienten mit dem angeblichen Allergen auszuschließen;
  • Leukozytopenische und thrombozytopenische Tests: Eine Untersuchung der Anzahl der Leukozyten und Blutplättchen im Blut nach Einführung des Allergens. Bei Allergien reduziert sich deren Anzahl.

Neben den Tests bei der Allergiediagnostik wird in weitem Umfang der Bluttest auf Immunglobuline der Klassen E und G angewendet.

Allergenblutuntersuchungen

IgE - dies sind Antikörper, die die Entwicklung von Allergien direkt beeinflussen. Die Menge an IgE in der Norm ist normalerweise gering, aber bei einer Person, die zu allergischen Reaktionen neigt, erhöht. Bei der Identifizierung von Allergien ist es jedoch wichtig, nicht nur den Gesamtgehalt an IgE zu kennen, sondern auch die Anzahl der spezifischen Immunglobuline, die Antikörper gegen das eine oder andere Allergen sind. Führen Sie dazu die folgenden Tests durch:

PACT (Radio-Allergietest)

Dieser Test ermöglicht die Identifizierung spezifischer Immunglobuline der Klasse E für bestimmte Allergene. Eine radioaktive Markierung, die an IgE bindet, wird in einen kleinen Teil des venösen Bluts des Patienten injiziert. Dann wird ein Tropfen dieses Blutes auf eine Papierscheibe gegeben, die mit einer Allergenlösung getränkt ist. Wenn das Blut spezifische Antikörper enthält, bindet das Antigen an den Antikörper. Anschließend wird dieser Probe ein radioaktives Isotop hinzugefügt, das an den Antigen + Antikörper-Komplex bindet. Mit Hilfe einer speziellen Apparatur kann die Menge an gebundenem IgE bestimmt werden.

Diese Methode ist sehr empfindlich und kann die niedrigste IgE-Konzentration im Blut des Patienten bestimmen. Aber gleichzeitig ist es ziemlich teuer. Daher wird PACT zusammen mit Hauttests verwendet, wenn das Ergebnis der letzteren unsicher ist. Oder in Fällen, in denen Hauttests kontraindiziert sind (Kinder unter 5 Jahren, Patienten mit einem schweren akuten allergischen Prozess).

MAST (mehrfacher Allergietest)

Bei der IgE-Bindung wird kein radioaktiver Marker verwendet, sondern ein Enzym, das mit einem Antikörper reagiert und Lumineszenz verursacht - ein Leuchten, das durch das Aufnehmen eines Fotos auf einem speziellen Film behoben werden kann. Ein solcher Test ermöglicht die Identifizierung von mehr als 30 Antigenen.

Die Bestimmung des IgG-Spiegels im peripheren Blut kann einen wichtigen diagnostischen Wert bei der Erkennung von Allergien haben. Schließlich treten allergische Reaktionen II (zytotoxisch) und Typ III (Immunkomplex) mit erhöhter Produktion von Immunglobulinen dieser Klasse auf.

Bei der Entwicklung vieler allergischer Reaktionen spielt IgG eine Schlüsselrolle, die wie IgE eine basophile Degranulation verursachen und das Komplementsystem aktivieren kann. IgG-vermittelte allergische Reaktionen treten auf, wenn das Allergen (in der Regel Lebensmittel) über einen längeren Zeitraum aufgenommen wurde.

Patienten mit einer IgE-vermittelten Art der Nahrungsmittelallergie kennen die Produkte, die zu einer allergischen Reaktion führen, in der Regel, da die Reaktion unmittelbar nach der Einnahme des Allergens erkannt wird. Patienten mit IgG-Typ-Allergien können Lebensmittel, die von der Diät ausgeschlossen werden müssen, nicht eigenständig identifizieren. Sie haben jahrelang versucht, mit chronischen Krankheiten fertig zu werden, ohne zu wissen, dass das Problem darin liegt, dass sie täglich ein allergenes Produkt konsumieren.

Spezielle Labortests ermöglichen die Identifizierung spezifischer Antikörper gegen Dutzende von Nahrungsmittelallergenen. Abhängig von der Zunahme, bei der spezifisches IgG nachgewiesen wird, wird dem Patienten empfohlen, das Produkt, das die Produktion dieser Antikörper verursacht, von der Diät auszuschließen.

Die Kombination von Proben für spezifische G- und E-Immunglobuline identifiziert die Art der Nahrungsmittelallergie zuverlässiger und genauer. Bei einer IgG-vermittelten Reaktion bleibt der IgE-Spiegel normal oder sinkt leicht ab, und die Menge an spezifischem IgG steigt dramatisch an. Dieses Merkmal ist für verzögerte allergische Reaktionen charakteristisch.

Bei der Interpretation der Testergebnisse für spezifisches IgG sollte berücksichtigt werden, dass Antikörper dieser Klasse die Funktion haben können, Antikörper zu blockieren, die Manifestationen von IgE-vermittelten allergischen Reaktionen zu mildern, und auch, dass IgG-Spiegel angeboren sind. Für eine genaue Diagnose von Allergien ist daher eine umfassende Beurteilung der Anamnese, der Proben und der Laborparameter erforderlich.

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DIAGNOSTIKMETHODEN IN VITRO

Die Hauptindikationen sind:

- frühe Kindheit;

- eine hohe Sensibilisierung der Patienten;

- kontinuierlich rezidivierender Krankheitsverlauf ohne Remissionsperioden;

- die Unfähigkeit, Antihistaminika und andere Drogen abzusetzen;

- polyvalente Sensibilisierung, wenn in einem begrenzten Untersuchungszeitraum keine gleichzeitige In-vivo-Untersuchung mit allen vermuteten Allergenen möglich ist;

- stark veränderte Hautreaktivität;

- falsch-positives oder falsch-negatives Ergebnis beim Hauttest;

Die wichtigsten Vorteile spezifischer In-vitro-Diagnosemethoden sind:

- Sicherheit für den Patienten;

- hoher Standard und Reproduzierbarkeit;

- die Möglichkeit einer quantitativen (digitalen) Rechnungslegung;

- die Möglichkeit der Forschung in dem Fall, in dem sich der Patient in größerer Entfernung vom Allergologen befindet und nur das Patientenserum geliefert wird;

- eine kleine Menge Blut für die Forschung.

Moderne Methoden zur In-vitro-Diagnose allergischer Erkrankungen sind in der Tabelle dargestellt. 1

Moderne Methoden zur In-vitro-Diagnostik allergischer Erkrankungen

Methoden zur Bestimmung des gesamten IgE-Serums im Blutserum

Die Konzentration von IgE im Serum gesunder Menschen ist in der Tabelle dargestellt. 2

Bei allergischen Reaktionen vom Soforttyp steigt der IgE-Gesamtwert im Blutserum in der Regel an, in einigen Fällen kann dieser Indikator jedoch der Norm entsprechen. Säuglinge mit einem hohen IgE-Spiegel haben jedoch ein erhöhtes Risiko für die Entwicklung von Allergien. Atopische Erkrankungen betreffen 95% der Kinder mit hohem IgE-Spiegel. Bei etwa 70% der Erwachsenen mit Patienten mit exogenem Asthma und allergischer Rhinitis liegt der IgE-Spiegel um zwei Standardabweichungen über dem Standard. Besonders hohe IgE-Spiegel (mehr als 1000 IE / ml) werden bei diffuser Neurodermitis und atopischen Erkrankungen des Atmungssystems festgestellt.

Die Konzentration von IgE im Serum gesunder Menschen

Hochempfindliche immunologische Studien, die auch geringe IgE-Konzentrationen (weniger als 50 IE / ml) nachweisen können, sind:

1. Immunassay (ELISA). Um den Gesamtgehalt an IgE zu quantifizieren, wird ein Festphasen-ELISA verwendet (6), bei dem Antikörper gegen IgE an einem festen Träger adsorbiert werden, beispielsweise in Vertiefungen einer Polystyrolplatte. Der bei der Verabreichung des Testserums gebildete Komplex wird durch Zugabe der entsprechenden mit der Enzymmarkierung konjugierten Antikörper (Meerrettichperoxidase, Beta-Galactosidase oder alkalische Phosphatase) nachgewiesen.

Das Prinzip der Einstellung des ELISA zur Bestimmung von IgE

Nach dem Kombinieren des Antigens mit dem Enzym-markierten Immunserum wird das Substrat / Chromogen zu der Mischung gegeben. Das Substrat wird durch das Enzym gespalten und die Farbe des Reaktionsprodukts ändert sich; Die Farbintensität ist direkt proportional zur Anzahl der gebundenen Antigenmoleküle und markierten Antikörper. Ein positives Ergebnis verändert die Farbe des Chromogens. Nach jeder Zugabe der nächsten Komponente werden ungebundene Reagenzien durch Waschen aus den Vertiefungen entfernt. Die Berücksichtigung der Reaktionsintensität der Versuchs- und Kontrollproben erfolgt auf einem Platten-Spektrophotometer (ELISA-Reader) nach der Lichtabsorption mit einer bestimmten Wellenlänge (für das TMB-Chromogen (Tetramethylbenzidin) 450 nm).

2. Chemilumineszenz ("Sandwich") - Analyse unter Verwendung einer paramagnetischen Markierung.

Anti-IgE-AT, markiert mit einer Lumineszenzmarkierung (Acridinester), wird zum Patientenserum gegeben. Nach dem Waschen nicht gebundener Antikörper werden Anti-IgE-Antikörper zugesetzt, die kovalent an paramagnetische Partikel gebunden sind. Um dies zu berücksichtigen, wird ein spezielles Messgerät benötigt, das ein Photometer und eine Elektrode mit einem Magneten umfasst. Der Magnet erfasst paramagnetische Partikel, die mit den IgE-Konjugaten assoziiert sind. Als Ergebnis der elektrochemischen Reaktion tritt die Lumineszenz der Markierung auf, die photometrisch gemessen wird. Beispiele solcher Vorrichtungen sind ACS: 180 (Ciba Corning Diagnostics Corp.), NPD (Calgon Vestal Laboratories), Clorox (Clorox Company). Die Methode ist hochempfindlich und ermöglicht die Bestimmung der Gesamt-IgE-Konzentration im Bereich von 1,5-3000 kE / l.

3. Radioimmunanalyse (RIA) ist eine Methode, die auf der Markierung einer der Komponenten einer immunologischen Reaktion (Antigen oder Antikörper) mit dem radioaktiven Isotop I125 basiert. Um den Gesamt-IgE-Gehalt zu quantifizieren, wird ein indirekter oder kompetitiver Festphasen-RIA verwendet (an der Festphase werden Capture-Anti-Human-IgE-Antikörper immobilisiert). Im letzteren Fall werden dem Patienten gleichzeitig das Serum des Patienten und eine bestimmte Menge an IgE-markiertem I125 zugesetzt. Durch die Reaktion erfolgt die Bindung dieser Komponente umgekehrt proportional zum IgE-Gehalt im Patientenserum. Die Ergebnisse werden mit einem Gammazähler auf die Radioaktivität der resultierenden Immunkomplexe ausgewertet.

Da RIA teure Geräte und Reagenzien sowie Bedingungen für das Arbeiten mit radioaktiven Isotopen erfordert, wird dies derzeit wenig genutzt.

In der modernen Praxis angewandte Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE im Serum

Hochempfindliche und spezifische Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischen IgE-Antikörpern sind PAST, MAST, Immunoblotting, Festphasen-ELISA, Microarray.

Der RAST-Test (Radioallergic Sorbent Test) ist eine Methode zur Bestimmung spezifischer IgE-Antikörper im Patientenserum gegen ein zuvor auf einem porösen Träger sorbiertes Allergen (Abb. 7).

Ein unlösliches Polymer wird in das Patientenserum eingeführt - ein allergenes Konjugat, das die Antikörper bindet, die für das verwendete Allergen spezifisch sind. Als nächstes füge Antiglobulinserum (Anti-IgE) hinzu, das mit einem radioaktiven Isotop markiert ist. Nach dem Waschen ungebundener Reagenzien werden die Ergebnisse unter Verwendung von Gammazählern hinsichtlich der Radioaktivität der gebildeten Immunkomplexe im Vergleich mit der Kontrolle und der Standardkurve bewertet.

Die Bestimmung von spezifischem IgE mit Hilfe von PACT zeigt ein hohes Risiko für anaphylaktische Reaktionen, Hautläsionen und -behandlung, was die Ergebnisse von Hauttests beeinflusst.

Gegenwärtig sind RAST der dritten Generation weit verbreitet, die sich durch hohe Empfindlichkeit und Spezifität, Automatisierung, Verwendung von Fluorochrom, Enzymmarkierungen oder Chemilumineszenz auszeichnen.

Das Prinzip der Einstellung von RAST (von L. Wide)

Bestimmung von allergenspezifischem IgE in PACT mit Fluoreszenzmarker

Fügen Sie dem auf dem Celluloseträger sorbierten Allergen das Serum des Patienten hinzu. Dann werden enzymmarkierte (& bgr; -Galactosidase) anti-IgE-AT, die an das resultierende Konjugat binden, zugegeben. Nach dem Waschen ungebundener Antikörper wird ein Substrat hinzugefügt (4-Methylimbelliferyl- & alpha; -D-galactosid), bei dessen Fermentation fluoreszierende Substanzen gebildet werden, deren Konzentration mit einem Lesegerät (FluoroCount) nachgewiesen wird.

Als Beispiel für eine Methode, die auf dem Effekt der Chemilumineszenz basiert, kann MAST angegeben werden.

MACT (Multiple Allergie Testing Test) ist ein Verfahren zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE, ähnlich dem PACT-Prinzip, bei dem das Allergen an Cellulosefilamenten sorbiert wird und auf einem Luminometer Photoreagenzien, deren Lumineszenz auf einem Polaroidfilm aufgezeichnet wird, auf einem Photometer verwendet werden (8).. Die Methode ermöglicht es Ihnen, die Ergebnisse der Studie schnell zu erhalten, die notwendigen Parameter selbst bei einem Patienten zu bestimmen, ohne auf die Ansammlung von Proben warten zu müssen, um den gesamten Satz zu verwenden.

Gerät zum Einstellen von MAST

1 - MAST-Plattenmontage; 2 - Abdeckung; 3 - Cellulosegarn mit adsorbiertem Allergen; 4 Körper

Pseudoimmunoblot - eine Methode, mit der Sie gleichzeitig spezifische IgE-Antikörper für das Spektrum von Allergenen (jeweils eines) in Serum oder anderem Material nachweisen können. Der Pseudoimmunoblot basiert auf Festphasen-ELISA, hat jedoch im Gegensatz zu letzterem eine größere Spezifität (aber weniger Empfindlichkeit), Ausführungsgeschwindigkeit, minimales Blutvolumen (weniger als 0,5 ml), Möglichkeit des gleichzeitigen Tests mit einer großen Anzahl von Allergenen (etwa 20 in jeder Gruppe).. Außerdem wird jetzt ein Programm zur hochpräzisen Verarbeitung der Ergebnisse angewendet.

Moderne Testsysteme basieren auf dem Prinzip einer zweistufigen Definition des Allergenstatus: Auf der ersten Ebene wird eine Standard-Allergieuntersuchung durchgeführt, mit deren Hilfe die Allergengruppe ermittelt werden kann, für die eine Sensitivität besteht. Danach ist es möglich, eine erweiterte (genauere und komplexere) Bestimmung der Empfindlichkeit gegenüber einem bestimmten Allergen durchzuführen.

Der klassische Immunoblot wird bei eindeutigen Hinweisen auf ein ursächliches Allergen (Daten aus Anamnese, Ausscheidungstest usw.) und bei negativen Testergebnissen für spezifisches IgE mit den charakterisierten Bestandteilen dieses Allergens verwendet. In solchen Fällen werden Blots aus einem groben Allergenextrakt erhalten und das Patientenserum wird auf das Vorhandensein von IgE analysiert, das für die Nebenkomponenten (nicht charakterisiert) des Allergens spezifisch ist.

Microarrey (Microarrey) ist eine relativ neue (in den 1990er Jahren entwickelte) und vielversprechende Richtung in der angewandten Molekularbiologie. Gegenwärtig hat die auf DNA-Oligonukleotiden basierende Mikroray-Technologie die meiste Aufmerksamkeit auf sich gezogen, aber der Micro-Ray entwickelt sich auch unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern und rekombinanten Antigenen. Diese Technologie wird insbesondere zur Diagnose und Optimierung der Behandlung von Allergien eingesetzt (Abb. 9).

Mikroarray-Schema zur Diagnose von Allergien

Die Studie wird in mehreren Schritten durchgeführt:

1. Vorbereitung des Mikrochips: Rekombinante Allergene werden auf der Oberfläche eines aktivierten Glasträgers ausgegraben (Tropfenvolumen ist Nanoliter, Antigenmenge ist Dutzende Pikogramme). Ein Glas enthält 12 Zellen. Jede Zelle enthält Dutzende (Hunderte) verschiedener Allergene und eine Kalibrierungskurve (steigende IgE-Mengen) in Tripletts.

So können bis zu 12 Patienten gleichzeitig untersucht werden.

a) Ausgraben von Patientenseren (15 μl);

b) Inkubation (IgE des Patienten bindet an Allergene);

c) die Zugabe von mit Fluorochrom markierten monoklonalen Anti-IgE-Antikörpern;

d) Scannen des Mikrochips;

e) typisches Mikrochip-Scanogramm:

- die ersten drei Reihen = Kalibrierungskurve (die Intensität des Glühens ist proportional zur Anzahl der festen IgE);

- ferner - das Sensibilisierungsprofil des Patienten (Spezifität und Menge an IgE im Patientenserum).

Tests der Zellaktivierung mit Allergenen (CAST) sind moderne Methoden zur Diagnose des GST-Mediator-Typs, die nicht durch IgE verursacht werden (10).

Das Prinzip der Einstellung von CAST / FAST

1 - Basophilenstimulation (IgE-abhängig unter Verwendung eines Allergens; unter Verwendung von Anti-FceRI-Antikörpern; IgE-unabhängig unter Verwendung von Nahrungsmittelzusätzen, nichtsteroidale entzündungshemmende Arzneimittel (Aspirin), Arzneimittel); 2 - Identifizierung von Basophilen. Nur für FAST durchgeführt, normalerweise mit Hilfe markierter Antikörper gegen IgE- oder Chemokinrezeptoren CCR3; 3 - Bericht über die Reaktion. CAST wird durch quantitative Bestimmung von Leukotrienen (Typ) berücksichtigt. FAST - durch Bestimmung des Prozentsatzes von aktivierten Basophilen (CD63 exprimierend) unter Verwendung von Cytofluorimetrie

Zuvor war eine ähnliche Reaktivität in Tests auf Leukozytenschädigung und Stimulierung der Histaminfreisetzung durch Basophile festzustellen, sie sind jedoch zu umständlich, schlecht reproduziert und für eine Standardisierung nicht geeignet. СAST / FAST wird in mehreren Schritten abgelegt:

1. Isolierung von Blutleukozyten:

a) Zugabe von Dextran zum stabilisierten Blut, um Erythrozyten auszufällen;

b) der Überstand wird zentrifugiert, um Leukozyten auszufällen (Entfernung von Dextran und Blutplättchen);

c) Leukozytenpellet wird in einer Pufferlösung resuspendiert, die IL3 enthält.

2. Stimulation von Leukozyten

a) mit Anti-FceRI-Antikörpern (Positivkontrolle);

b) Kochsalzlösung (Negativkontrolle);

c) Allergene in verschiedenen Konzentrationen.

3. Die Überstände werden ausgewählt und der Leukotriengehalt wird sofort durch Festphasen-ELISA bestimmt. Für die Quantifizierung müssen mehrere Verdünnungen von Standards zum Erstellen einer Kalibrierungskurve verwendet werden.

4. Interpretation des Tests. Bei Nahrungsmittelallergenen beträgt der untere (Schwellenwert) (Grenzwert) normalerweise 400 pg / ml; für Lebensmittelzusatzstoffe, Medikamentenallergene, Luftallergene - etwa 40 pg / ml.

FAST unterscheidet sich von CAST in der Zählweise der aktivierten Basophilen: der Nachweis und die Zählung des Prozentsatzes von Zellen, die CD63 und assoziiertes IgE exprimieren (Fig. 11). Zellen, die für uns von Interesse sind, sollten an die Oberfläche gebundenes IgE aufweisen, d. H. Mit FITC markierte Anti-IgE-Antikörper binden und stark grün leuchten. Aktivierte Mastzellen exprimieren zusätzlich CD63, binden mit PE markierte Anti-CD63-Antikörper und leuchten rot. Der Test ist also positiv, wenn im zweiten Quadranten ein signifikanter (> 5–15%) Prozentanteil der Zellen (Punkte in der Grafik) gefunden wird. Derzeit gibt es handelsübliche Kits für die Formulierung kombinierter Tests (CAST und FAST in einem Reagenzglas).

Es sei darauf hingewiesen, dass CAST / FAST die Leukotrien-Sekretion durch Leukozyten sowohl in Verbindung mit als auch ohne die Anwesenheit von allergenspezifischem IgE zeigt. Hauptindikationen für die Verwendung von CAST / FAST: Verdacht auf den Typ des GNT-Mediators und das Fehlen von spezifischem IgE; das Vorhandensein einer Überempfindlichkeit gegen Lebensmittelzusatzstoffe und Arzneimittelallergene; Diagnose von Aspirin-Asthma und ähnlichen Erkrankungen. CAST / FAST werden nicht als Tests für allergologische Primäruntersuchungen empfohlen (sie sind schwieriger, teurer und unterlegen gegenüber Standardtests zum Nachweis von spezifischem IgE (UniCAP usw.)).

a - Negativkontrolle; b - positive Kontrolle. Bezeichnungen: PE-Phycoerythrin (rotes Glühen); FITC - Fluorescein (grün); Q1-4 - Quadranten im Zellverteilungsdiagramm (Q1 - starkes rotes Glühen, schwach grün; Q2 - starkes Rot und starkes Grün; Q3 - schwach rot und schwach grün; Q4 - schwach rotes und starkes grünes Glühen)

Methoden zur Erforschung pro-allergischer Zytokine und Mediatoren der Immunentzündung.

Bestimmung von Mediatoren und Cytokinen im systemischen Kreislauf (üblicherweise nach der Festphasen-ELISA-Methode):

1. Der Nachweis von Histamin ist aufgrund der extrem hohen Inaktivierungsrate (Minuten) schwierig. Daher wird der Nachweis von Methyl-Histamin im Urin häufiger für den Nachweis seines Vorhandenseins im systemischen Kreislauf verwendet (anaphylaktischer Schock) (hoher Spiegel bleibt mehrere Stunden nach dem Verschwinden einer systemischen Anaphylaxie bestehen).

2. Bestimmung der Tryptase im Serum. Tryptase ist in Mastzellgranulat enthalten und wird lange (mehrere Stunden) im Kreislauf gehalten.

3. Die Bestimmung des Cytokinstatus des peripheren Blutes (IL4, IFN & sub3 ;, IFN & sub2; / IL4) gibt eine sehr allgemeine Vorstellung von der Art der Reaktion des Immunsystems zum Zeitpunkt des Tests. Es war in den 80ern populär. des letzten Jahrhunderts. Später - in den 90ern. Das Th1 / Th2-Modell ist der Untersuchung der Rolle von T-Regulatoren bei Allergien gewichen.

4. Bestimmung des Inhalts von Zellen, die bestimmte Zytokine sekretieren. Derzeit ist es möglich, diese Parameter für allergenspezifische Zellen zu bestimmen (Tetramer-Technologie). Für diese Zwecke werden häufig Durchflusszytofluorimetrie und Alispot verwendet.

Bestimmung von Zytokinen und Mediatoren in Geweben (ermöglicht es Ihnen, die Art der Entzündung, ihre Intensität und die vorherrschende Pathogenese festzustellen):

1. Definition von NO in der ausgeatmeten Luft: Ein einfacher nichtinvasiver Test, mit dem Sie die Intensität des Entzündungsprozesses in den Atemwegen verfolgen können (Überwachung der Behandlung von Bronchialasthma).

2. Bestimmung von Mediatoren und Zytokinen in Waschlösungen, Exsudaten und anderen abnehmbaren beschädigten Geweben.

3. Identifizierung von Zellen, die Zytokine und Mediatoren auf Abschnitten von Biopsien beschädigten Gewebes synthetisieren.

4. Quantitative Bestimmung der mRNA von Cytokinen und Mediatoren in Waschlösungen, Abfällen und Biopsiematerial.

Es wird darauf hingewiesen, dass die Methoden zur Bestimmung von Cytokinen in allergischen Prozessen hauptsächlich für wissenschaftliche Zwecke verwendet werden.

Tests von historischer Bedeutung

Shelley / Schwartz-Test - Basophil / Mastzell-Degranulation in Gegenwart eines spezifischen Allergens. Der Test wurde in der Labordiagnose von allergischen Erkrankungen des GNT-Typs I weit verbreitet.

Indirekter basophiler Test (Shelley-Test). Dieser Test basiert auf der Untersuchung der morphologischen Veränderungen von Basophilen infolge der Interaktion des Patientenserums mit einem bestimmten Allergen. Neutralroter Farbstoff färbt basophile Granulate selektiv in ziegelroter Farbe, wodurch sie von anderen Zellen unterschieden werden können. Die Reaktion wird unter einem Mikroskop mit einem Tauchsystem beobachtet. Unveränderte Basophile haben eine abgerundete Form; Die farbigen Körnchen befinden sich innerhalb der Zelle. Die positive Reaktion äußert sich in der Verformung der Zellen, der Bildung von Pseudopodien, der verstärkten Bewegung der Granula und in seltenen Fällen der Freisetzung der Granula aus der Zelle mit ihrem Bruch. Jedes Präparat hat 40 Basophile, der Prozentsatz an morphologisch veränderten Zellen wird sowohl im Experiment als auch in der Kontrolle berechnet.

Ordnen Sie bedingt 3 Reaktionsgrade zu: schwach (der Prozentsatz der veränderten Basophilen im Versuch übersteigt den in der Kontrolle um 10%), moderat (um 15%), stark positiv (um 20% oder mehr). In allen Fällen bezieht sich dies auf die Ergebnisse der Kontrolle mit der höchsten unspezifischen Reaktion der Basophilen.

Direkter basophiler Test (Shelley-Test). Dieser Test basiert auf der Untersuchung der morphologischen Veränderungen in den Basophilen des peripheren Bluts eines Patienten mit einer allergischen Erkrankung bei der Interaktion mit einem bestimmten Allergen. Die Bewertung der Reaktion wird ähnlich wie die Bewertung mit einem indirekten basophilen Test durchgeführt.

Die Reaktion von Granulozytenschäden (RPG), der Neutrophilenschädigungsindex (PPN), die Reaktion der Freisetzung von Kalium aus Leukozyten, Enzymen usw. Im Rahmen dieses Ansatzes gibt es eine Vielzahl von Methoden. Beispielsweise werden isolierte Leukozyten für eine bestimmte Zeit mit einer Allergenlösung inkubiert, woraufhin Schäden an Neutrophilen aufgezeichnet werden:

- morphologisch: durch Veränderung der Morphologie, durch Anfärben mit Trypanblau, Ethidiumbromid usw. (beschädigte / tote Zellen werden angefärbt);

- photometrisch: Die Zunahme der Kaliumionenkonzentration wird auf einem Flammenphotometer bestimmt, die Freisetzung von Myeloperoxidase wird durch die Fermentation des Substrat-Chromogens und die Änderung der Farbe der Lösung auf einem Tablettenphotometer bestimmt.

Die Reaktion der Freisetzung von Histamin aus Basophilen des menschlichen peripheren Bluts beruht auf der Berücksichtigung der Freisetzung von Histamin nach Behandlung von Basophilen mit spezifischen Allergenen. Stimulanzien für die Histaminfreisetzung aus Zellen sind Allergene, Anti-IgE, C5a. Eine Reihe von Cytokinen - IL-3, IL-5, CSF-GM - erhöhen die Freisetzung von Histamin durch Basophile. Der Test wurde verwendet, um den Sensibilisierungsgrad des Organismus in vitro bei Urtikaria, atopischer Dermatitis und in experimentellen Studien zu ermitteln.

Tests, die nicht zur Verwendung und / oder Interpretation empfohlen werden:

1. Definition von IgG, einschließlich IgG4 (außer wenn es darauf ankommt).

2. Kinesiologie (Metrie) - Kontakt (Demonstration) eines Patienten mit einem Allergen und gleichzeitige Messung der relativen Muskelkraft. Wenn ein ursächliches Allergen gefunden wird, verringert sich die Stärke. Wenn ein bestimmtes Gegenmittel entdeckt wird, wird es wiederhergestellt.

3. VEGA (Elektrothermometrie, Volltest) - Messung der Haut (Gewebe) -Widerstand zwischen Akupunkturpunkten bei gleichzeitiger Berührung (Demonstration) mit einem Allergen. Es gibt kommerzielle Geräte und Testsysteme.

4. Auriculocardial Reflex - Messung von Blutfüllungsparametern / Puls usw. im Moment des Kontakts mit einem Allergen.

5. Test-Provokationsneutralisation: Produktion von Haut- oder anderen Proben mit einer allmählichen Erhöhung der Allergenkonzentration, um eine ausgeprägte Reaktion zu erreichen. Auflösungskonzentration finden. Legen Sie anschließend die Probe und reduzieren Sie die Konzentration des Allergens allmählich, bis die Reaktion verschwindet. Diese Konzentration kann zur gezielten Desensibilisierung verwendet werden.

6. Analyse der Blutreaktion: Ein Tropfen Blut wird mit Allergen- / Lebensmittellösungen usw. gemischt. Nach einiger Zeit werden Änderungen im experimentellen Tropfen mikroskopisch mit der Kontrolle verglichen.

7. Iridologische Allergie.

8. Diagnose von Allergien gegen gestörte Zirkulation verschiedener mystischer Energieformen des menschlichen Körpers oder Geistes.

http://med-books.info/immunologiya-allergologiya_745/metodyi-diagnostiki-vitro.html

MACT (mehrfacher Allergietest)

Interpretation der Analyse

n Als Ergebnis wird geschätzt, zu welcher Klasse ein Allergen gehört. Bei der Identifizierung der Klassen 3 und 4 und der relevanten Daten des Krankheitsbildes können wir von diesem Allergen als ursächlich sprechen.

n Bei der Identifizierung der Klassen 1 und 2 ist es notwendig, mit den Daten des Krankheitsbildes, der Dauer der Erkrankung, zu vergleichen, wobei das Vorhandensein einer möglichen Kreuzreaktivierung zu berücksichtigen ist.

n Bei der Bewertung der Ergebnisse der Bestimmung von Serum-IgE und beim Vergleich mit den Ergebnissen von Hauttests muss berücksichtigt werden, dass die Serum-Halbwertszeit von IgE 2-3 Tage beträgt und die Mastzellen in der Haut bis zu mehreren Monaten dauern.

n Das Zusammentreffen positiver Ergebnisse bei MAST- und Hauttests wird anhand der Intensität der Reaktion und der Liste der Allergene beobachtet.

3.2.4 Chemilumineszenz (MAST CLA).

n Allergisches Screening IgE: quantitative Bestimmung von s IgE gegen 36 Allergene

Aspergilluspilz, Kladosporiumpilz, schwarze Erle, weiße Birke, Haselpollen, Schwingel, Igel, Roggen, Timothy, Quinoa - Mischung, Löwenzahn, Wermut - Mischung, Federn - Mischung, Pferd, Hund, Katze, Schabenmischung - Hausstaub - Mix, D.Pterony Tick, D.Farinae Tick, Apfel, Rind, Karotten, Getreide - Mix (Mais, Hafer, Reis), Huhn, Kabeljau, Vollei, Haselnuss, Kuhmilch, Erbsen, Schweinefleisch, Kartoffeln, Soja, Erdbeere, Tomate, Weizen).

n Lebensmittelpanel IgE: Quantitative Bestimmung von sIgE für 36 Nahrungsmittelallergene (Gesamt-IgE, Mandeln, Bananen, weiße Bohnen, Rindfleisch, Karotten, Kohl, Mischung (Weiß, Broccoli, Farbe), Sellerie, Huhn, Schokolade, Kabeljau, Mais, Ei (Eiweiß), Ei ( Eigelb), Knoblauch, Milch, Speisepilze, Zwiebelmischung (weiß, gelb), Orange, Erbsen, Erdnüsse, Schweinefleisch, Kartoffeln, Rosinen, Reis, Roggen, Meeresfrüchte - eine Mischung (Muschel, Krabbe, Garnelen), Soja, Kürbis Mischung, Zuckermischung, Tomaten, Thunfisch, Truthahn, Walnuss, Weizen, Hefe).

n Allergisches Screening IgE (20): Quantitative Bestimmung von IgE gegen 20 Allergene (weiße Birke, Ragweed (Gemisch), Wachholz, Latex, Sojabohnen, Reis, Dorsch, Weizen, Erdnüsse, Eiweiß, Milch, Aspergillus-Pilz, Kladospohum-Pilz, Alternaha-Pilz, Hund, Katze, Kakerlake, D.Pteronymilbe, D.Farinae Milbe).

Die normalen Grenzwerte für Immunglobulin E (IgE)

http://infopedia.su/11xaf30.html

Labormethoden der allergischen Diagnose

Diese Verfahren können bei allergischen Erkrankungen in der Akutphase, in der Zeit des massiven Kontakts mit dem Allergen, mit einer hohen Empfindlichkeit des Patienten gegen das Allergen, bei Kontraindikationen bei Kindern, bei der Erkennung von allergischen Berufskrankheiten breit angewendet werden, da sie die Möglichkeit unspezifischer, falsch allergischer Reaktionen ausschließen.

Zu den Methoden, die eine allergische Reaktion eines unmittelbaren B-abhängigen Typs feststellen, gehören:

a) Bestimmung von Gesamt-IgE (sein hoher Spiegel kann jedoch in der produktiven Phase der Immunantwort sein),

b) Bestimmung von allergenspezifischem IgE und IgG4.

Die IgE- und IgG4-Spiegel werden durch ELISA bestimmt (siehe Klasse 6).

Der Nachweis von IgE und IgG4 wird gegen mehr als 400 Allergene einschließlich Lebensmittelallergene durchgeführt. Allergene gegen Bakterien und Pilze, Tierhaare und Tierhaare, Vogelfedern; Allergene von Gras und Baumpollen; Allergene von Zecken, Haus- und Bibliotheksstaub, Insekten; medizinische und berufliche Allergene.

Gegenwärtig sind Testsysteme entwickelt worden, die eine mehrfache Diagnose von spezifischem IgE ermöglichen. Der mehrfache Allergosorbent-Test mit Chemilumineszenz-Analyse (MAST-CLA oder MAST-Allergotest) ermöglicht die gleichzeitige Bestimmung von bis zu 36 Allergenen mit einer geringen Serummenge (0,75 ml). Für den Test wird das MAAST-Alleropanel verwendet, bei dem es sich um ein hohles transparentes Kunststoffgehäuse handelt, bei dem die dünnsten Zellulosefäden parallel nach innen liegen und an denen Allergene sorbiert werden (Abb. 9.1).

Hinweis: 1 - MAST-Plattenmontage, 2 - Abdeckung,

3 - Cellulosegarn mit adsorbiertem Allergen, 4 - Körper

Abb. 9.1 Prinzip der Chemilumineszenzanalyse während des MAST

Der Kern des MAST-Allergietests besteht darin, die Reaktion der Bindung des Allergens mit spezifischem IgE durchzuführen, gefolgt von der Markierung des resultierenden Komplexes mit einem Photoreagenz und der Bestimmung seiner Lumineszenz, deren Intensität der Konzentration des spezifischen IgE im Patientenserum proportional ist. MAST Alleropanel wird (mit einer herkömmlichen Spritze) mit Patientenserum gefüllt und bei Raumtemperatur für 16 bis 24 Stunden inkubiert. Nach dem Waschen der Platte mit normalem destilliertem Wasser mit einem Puffer wird sie mit einem Konjugat (Peroxidase-markiertem Anti-IgG) gefüllt und 4 Stunden inkubiert. Nach dem Waschen wird die Platte mit einem Photoreagenz gefüllt und in Luminometern analysiert. Das Gerät registriert eine Klasse von Werten von 0 bis 4 entsprechend dem Lumineszenzgrad von jedem einzelnen Filament der Platte. Diese Klassen entsprechen den Klassen von Hautproben. IgE-Spiegel, die den MAST-Allergieklassen und den Luminometer-Werten entsprechen, sind in Tabelle 9.2 dargestellt.

Interpretation der Ergebnisse bei Durchführung eines multiplen Allergietests

Neben dem Nachweis von spezifischem IgE werden andere Labortests verwendet, um sowohl antikörperabhängige als auch verzögerte Reaktionen zu diagnostizieren. Mit diesen Methoden können wir die Pathogenese allergischer Reaktionen untersuchen. Dazu gehören:

- Mastzellen- oder Basophilen-Degranulationsreaktion,

- die Reaktion der Hemmung der Migration von Blutleukozyten (RTML),

- Neutrophilenschadenreaktion (RPN),

- Definition von freiem gebundenem Histamin,

- Bestimmung von IL 4,5,6, TGFb,

- Bestimmung von Tryptase und Chymotryptase (Tryptase, insbesondere die β-Form, kann 4 Stunden nach der anaphylaktischen Reaktion im Blut nachgewiesen werden und dient als klinischer Marker für Anaphylaxie),

- Bestimmung von Leukotrienen (LTC4, LTD4, LTE4) unter Verwendung des Freisetzungstests des Zellmediators,

- Bestimmung der Anzahl der aktivierten Basophilen, die das CD63-Antigen (gp53) auf der Oberfläche als Reaktion auf eine Allergenstimulation exprimieren (zytometrischer Allergen-stimulierender Zelltest, CASC-Test).

Durch die Definition dieser Indikatoren können Sie die individuellen Merkmale des Verlaufs allergischer Reaktionen verstehen, die für die Behandlung eines Patienten wichtig sind.

Der Zelltest für die Freisetzung von Mediatoren basiert auf der Bestimmung von Sulfidol-Leukotrienen (LTC4, LTD4, LTE4), die von Basophilen unter dem Einfluss eines Allergens in vitro sekretiert werden (Abb. 9.2). Es wird auch ein provokativer Test in vitro genannt. Aufgrund der De-novo-Synthese von Sulfidol-Leukotrienen hat dieser Test eine höhere Spezifität als der klassische Histamin-Freisetzungstest. Das Studienprotokoll umfasst drei Schritte:

1) Isolieren der Lymphozytenpopulation aus stabilisiertem Blut-EDTA,

2) Stimulation der Lymphozytensuspension durch spezifische Allergene,

3) Enzymgebundener Immunosorbens-Assay von Leukotrienen, die von Basophilen während der Stimulation synthetisiert werden.

Abbildung 9.2 Prinzip der basophilen Antigenstimulationstests

Der Test gilt als positiv für Lebensmittel, Inhalationsallergene, Latex, Insektengifte bei der Bestimmung des Leukotrien-Gehalts von 200 pg / ml; für Arzneimittelallergene sowie Lebensmittel- und chemische Zusatzstoffe 40 pg / ml.

Die zytometrische Variante des Basophilen-Stimulationstests - ein zytometrisches Antigen, das den Zelltest (CASK-Test) stimuliert, ermöglicht die Bestimmung der Anzahl aktivierter Basophile, die das CD63-Antigen auf der Oberfläche exprimieren. Die Stufen der Lymphozytenisolation und der Stimulation ihrer Antigene für beide Varianten (Enzymimmunoassay und Zytometrie) sind identisch. Anstelle von Sulfidol-Leukotrienen bestimmt die dritte Stufe die Anzahl der aktivierten Basophilen, die das CD63-Antigen (gp53) auf der Oberfläche als Reaktion auf eine Stimulation durch das Allergen exprimieren. Der Test ist hochempfindlich und spezifisch für Reaktionen des anaphylaktischen Typs, insbesondere für Arzneimittelüberempfindlichkeit.

Im CASK-Test werden isolierte Leukozyten mit einem stimulierenden Puffer und einem Allergen inkubiert. Dann wird monoklonaler Anti-IgE-Antikörper mit fluoreszierender Markierung hinzugefügt, um Basophile zu identifizieren. Dann werden monoklonale Antikörper zu CD63 hinzugefügt (siehe Abb. 9.2). Die Expression von CD63 AH wird auf der Basophilenoberfläche durch Durchflusszytometrie bestimmt. Beispielsweise wird der Test für Nahrungsmittel- und Inhalationsallergene als positiv angesehen, wenn CD63 auf der Oberfläche von 15% der Basophilen exprimiert wird; für Insektengifte - 10%; Beta-Lactam-Antibiotika und Analgetika - 5% Basophile und Stimulationsindex 2. Berechnen Sie den Stimulationsindex, definiert als das Verhältnis von CD63 + Basophilen in der Probe mit Allergen (%) zur Anzahl dieser Zellen in der Probe ohne Allergen (%).

Caska Test ist spezifisch für die Bestimmung von IgE-vermittelten Allergie gegen Inhalationsallergene (bei Hauttests können nicht wegen der Gefahr von Bronchospasmen und Status Asthmaticus durchgeführt werden), Pollen, Medikamente, Beta-Lactam-Antibiotika, Muskelrelaxantien, Analgetika, Allergie gegen Latex, Stiche von Hautflügler Insekten, pseudoallergische Reaktionen auf entzündungshemmende nichtsteroidale Arzneimittel, die durch Komplementkomponenten induziert werden, Plasma, Bestimmung von Autoantikörpern gegen IgE. Die Ergebnisse des CASK-Tests korrelieren gut mit den Ergebnissen von Hauttests.

Beide Tests sind hochspezifisch für die Diagnose von Nahrungsmittelallergien und -intoleranzen, Inhalationsallergien, wenn Hauttests nicht durchgeführt werden können (Latexallergien, Insektenstiche von Hautflügler, Allergien bei Kindern, Arzneimittelallergien und -intoleranzen, verschiedene pseudoallergische Reaktionen).

Mit dem CASK-Test und dem zellulären Test der Freisetzung von Mediatoren bei der Diagnose von Nahrungsmittelallergien und -intoleranzen können pseudoallergische Reaktionen zur Erstellung einer hypoallergenen und Eliminationsdiät verwendet werden.

Diagnose pseudoallergischer Reaktionen. Pseudoallergische Reaktionen bei klinischen Symptomen mögen den durch IgE vermittelten Reaktionen ähneln, unterscheiden sich jedoch in ihrem Entwicklungsmechanismus. Ihre Entwicklung steht nicht im Zusammenhang mit der Produktion von Ab oder der Beteiligung sensibilisierter Lymphozyten. Bei der Pathogenese dieser Reaktionen gibt es nur zwei Stadien - pathochemische und pathophysiologische. In dieser Hinsicht liegt bei diesen Patienten die Serumkonzentration von IgE normalerweise im normalen Bereich.

Bei pseudoallergischen Reaktionen kommt es jedoch zu einer unspezifischen Freisetzung von Mediatoren: Histamin, Leukotriene, Prostaglandine. Für die Diagnose pseudoallergischer Reaktionen wird daher der CASA-Test verwendet, um aktivierte Basophile und zelluläre Tests der Freisetzung von Mediatoren nachzuweisen, um die Konzentration von LTC4, LTD4 und LTE festzustellen.

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57. Allergische Provokationstests, Kontraindikationen.

biologische In-vivo-Tests, mit denen eine Person eine sofortige Allergie gegen ein bestimmtes Allergen erkennen kann. Nur in Remission durchgeführt.

Basierend auf der Einführung des Allergens im Zielorgan.

Sind zuverlässiger als Hauttests.

wird bei Unstimmigkeiten zwischen Anamnese und Hauttestergebnissen verwendet

Provokative Tests sind kontraindiziert, wenn in der Vergangenheit schwere Manifestationen von LA aufgetreten sind: Stevensen-Johnson-Syndrom, Lyell-Syndrom, IEE, ASH.

58. Liste der In-vitro-Diagnosemethoden. Die wichtigsten Vorteile von In-vitro-Diagnosemethoden. In der modernen Praxis angewandte Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE im Serum. MACT (mehrfacher Allergietest).

In-vitro-Diagnosemethoden

Die Diagnose einer Allergie bei Blutuntersuchungen ist ein moderner Trend in der Allergologie.

Im Gegensatz zu Hauttests und provokativen Tests führen Bluttests beim Patienten nicht zur Entwicklung allergischer Reaktionen, haben praktisch keine Kontraindikationen und werden für jede Form von Allergie empfohlen.

Die Hauptindikationen sind:

frühe Kindheit;

hohe Sensibilisierung der Patienten;

kontinuierlich rezidivierender Krankheitsverlauf ohne Remissionsperioden;

die Unfähigkeit, Antihistaminika und andere Drogen abzubrechen;

Polyvalente Sensibilisierung, wenn in einem begrenzten Untersuchungszeitraum keine gleichzeitige In-vivo-Untersuchung mit allen vermuteten Allergenen möglich ist;

stark veränderte Hautreaktivität;

falsch positives oder falsch negatives Ergebnis für Hauttests;

Die wichtigsten Vorteile spezifischer In-vitro-Diagnosemethoden sind:

Sicherheit für den Patienten;

hoher Standard und Reproduzierbarkeit;

Möglichkeit einer quantitativen (digitalen) Abrechnung;

die Möglichkeit, eine Studie durchzuführen, wenn sich der Patient in großer Entfernung vom Allergologen befindet und nur das Patientenserum abgegeben wird;

wenig Blut für die Forschung.

Die Methoden der In-vitro-Diagnostik umfassen:

Bestimmung des Gesamt-IgE.

Bestimmung von allergenspezifischem IgE.

Bestimmung von allergenspezifischem IgG (total oder nur G4-Isotyp).

Bestimmung von Histamin, Sulfoleukotrienen und anderen Mediatoren allergischer Reaktionen, Cytokinen und entzündlichen Enzymen.

Bewertung des Expressionsniveaus von Transmembranproteinmarkern der Aktivierung von immunkompetenten Zellen durch Durchflusszytometrie.

Zelluläre Tests und Reaktionen (Identifizierung verschiedener Subpopulationen von Lymphozyten, die an der Immunantwort beteiligt sind, und Bewertung ihrer funktionellen Aktivität).

In der modernen Praxis angewandte Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE im Serum

Hochempfindliche und spezifische Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischen IgE-Antikörpern sind:

RAST (radio allergischer Test)

MAST (mehrfacher Allergietest)

MACT (mehrfacher Allergietest)

Verfahren zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE, ähnlich dem PACT-Prinzip, bei dem das Allergen an Cellulosegarnen sorbiert wird und Photoreagenzien als Indikator für die Reaktion verwendet werden, deren Lumineszenz auf einem Luminometer auf einem Photometer aufgezeichnet wird

Die Methode ermöglicht es Ihnen, schnell Ergebnisse zu erzielen

Forschung, ermöglicht es, die notwendigen Parameter auch bei einem Patienten zu bestimmen, ohne auf die Ansammlung von Proben zu warten, um den gesamten Satz zu verwenden.

59. Immunodeficiency-Erkrankungen Grundbegriffe. Primärer Immundefekt, Einstufung. Die Immunopathologie ist ein Bereich der Immunologie, der die Immunopathogenese und Erkrankungen des Immunsystems untersucht. Gegenwärtig unterscheidet man eine Reihe von Zuständen und Erkrankungen des Immunsystems, wie Immunschwäche (primär und sekundär), Autoimmunerkrankungen, allergische Erkrankungen, HIV-Infektion, infektiöse Mononukleose, lymphoproliferative Erkrankungen usw. Immundefekte - Störungen der immunologischen Reaktivität, die durch den Verlust einer oder mehrerer Komponenten des Immunapparates oder durch eine enge Wechselwirkung mit unspezifischen Faktoren verursacht werden. Primäre Immundefekte sind eine heterogene Gruppe von Erbkrankheiten, die auf Mutationen von Genen mit Defekten in einer oder mehreren Komponenten des Immunsystems zurückzuführen sind. Diese Krankheiten sind das Ergebnis einer Überempfindlichkeit gegen Infektionen, einer Prädisposition für Autoimmunerkrankungen sowie allergischer und onkologischer Erkrankungen. Einstufung: Kombiniertes T und B zelluläres Immunodef. - Antikörpermangel - Syndrome mit ausgetretenen Symptomen - Gen zur Fehlregulierung der Immunität - angeborene Defekte von Phagozyten - Defekte der angeborenen Immunität - entzündliche Erkrankungen - Komplementmängel60. Die wichtigsten klinischen Anzeichen einer primären Immunschwäche. Besorgnis erregende Anzeichen für FID. Allgemeine klinische Charakteristika der PID - Manifestation der Immunschwäche von frühem Alter. - Rezidivierende Läsionen der HNO-Organe und Atmungsorgane. - Rezidivierende pyogene Infektionen. - Opportunistische Infektionen. - Rückfall von Krankheiten, die durch denselben Wirkstoff verursacht werden. - Autoimmunerkrankungen oder chronische Erkrankungen. - Argiooteka.

9-10 Anzeichen von Alarm in Bezug auf FID. - häufige Otitis (6-8 Mal pro Jahr) - Sinusitis (4-6 Mal pro Jahr) - Lungenentzündung (zweimal und häufiger pro Jahr) - Haut- und Organprozesse - Antibiotika-Therapie für mehr als 2 Monate - nicht weniger als 2 Infektionen Meningitis, Osteomyelitis, Sepsis. -die Wachstum und Gewichtsabnahme des Kindes - Soor- oder Pilzläsionen der Haut über 1 Jahr. -die Anwesenheit in der Familie von Patienten FID, früher Tod von Kindern durch Infektionen.

Allgemeine Wedge-Charakterisierung von PID-T-Zellen: - Auftreten von Symptomen im Säuglingsalter - Wiederholte Infektionen - Opportunistische Infektionen - Infektion durch Impfung. -Die Krankheit "Transplantat gegen Wirt" ist ein erhöhtes Malignitätsrisiko. Allgemeine Wedge-Charakterisierung von PID In Zellen: - Das Auftreten von Symptomen in einem frühen Alter nach dem Verschwinden von mütterlichen Antikörpern. - Wiederholte Infektionen - Chronische Infektionen - Meningitis, Septikämie, Osteomyelitis. - seltene Inzidenz von Pilzen und Viren. - Überleben bis zum reifen Alter bei adäquater Behandlung - Lymphatische Hypoplasie - Lymphoide Hyperplasie. - Erhöhte allergische und Autoimmunerkrankungen.

61. Beschreiben Sie das Syndrom der Ataxie-Teleangiektasie (Louis-Bar syn).

PID mit progressiver zerebraler Neurodegeneration. Die Krankheit ist multiorgan und ist neben mozhechkovoy Ataxie, geistiger Behinderung und Haut- und Augenteleangiektasie, wiederholten bronchopulmonalen Infektionen, erhöhter Strahlenempfindlichkeit, erhöhtem Malignitätsrisiko gekennzeichnet. Keilmanifestationen: manifestiert sich in der Kindheit, Tendenz zu Infektionen der Atemwege, instabiler Gang, unbequeme Bewegungen, Muskelhypotonie, vaskuläre Teleangiektasie. Kinderhaltung: Kopf und Schultern gesenkt, die Arme an den Ellbogen gebeugt. Die Kinder fühlen sich nicht sehr wohl. Sprache verschwamm, Amymie. Die Haut ist trocken, dünn, rau im Griff, tragbar. Usw. Immunmanifestationen: T-Lymphopenie, reduzierte IgA, Thymus-Hypoplasie, Lymphknoten, Milz. Behandlung: Ersatztherapie mit Immunglobulinen, Thymushormonen, Antibiotika, Antimykotika, immunotropen Medikamenten. Prognose: Im Durchschnitt werden die Patienten 14 bis 20 Jahre alt. Die Haupttodesursache ist ein Tumor. Meistens lymphoid. Schwere Infektionen können auch Todesursachen sein.

62. Beschreiben Sie das Syndrom Nijmegen.

Das Syndrom Nijmegen steht im Zusammenhang mit der Gruppe von Erkrankungen mit eingeschränkter DNA-Reparatur. Bestimmte Gendefekte NBS1. Patienten sind stark strahlungsempfindlich, ein hohes Risiko für Malignität, Immunschwäche und Wachstumsstörungen. Die Patienten haben eine klinisch exprimierte Mikrozephalie, eine Veränderung des Gesichtsgerüsts (Vogelgesicht) und eine hohe Infektempfindlichkeit. Auf den Hautflecken wie "Kaffee mit Milch". Behandlung - Immunglobuline, antivirale und Antimykotika.

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Mehrfach-Allergietest

Hitachi Chemical Diagnostics, Inc. (HCD), war das erste Unternehmen, das einen multiplen allergischen Sorbent-Test (MAST) mit Chemilumineszenz-Analyse zur Bestimmung des spezifischen IgE-Spiegels entwickelte. Allergotest MAST hat zweifellos Vorteile gegenüber anderen Methoden der In-vitro-Allergiediagnostik. kleines Serumvolumen (0,75 ml), das die gleichzeitige Bestimmung von bis zu 36 Allergenen ermöglicht, Sicherheit und Zuverlässigkeit der Chemilumineszenz-Analysetechnologie, hohe Spezifität und Empfindlichkeit, Reproduktionsrate, eine Vielzahl von untersuchten Allergenen.

HCD-Produkte werden in medizinischen Einrichtungen in mehr als 40 Ländern der Welt erfolgreich eingesetzt und geben Ärzten Zugang zu den neuesten Technologien.

In Russland werden HCD-Produkte seit 1998 von Lumineri vertreten. Um eine diagnostische allergene Zusammensetzung von MAST-Panels zu erstellen, untersuchten führende Experten - Allergologen und Immunologen Russlands rund 14.000 klinische Fälle sorgfältig und wählten nur die für russische Zustände charakteristischen Allergene aus. RMAPO, führende Experten des Wissenschafts- und Forschungsinstituts für Pädiatrie des Gesundheitsministeriums der Russischen Föderation, des Zentralklinikspitals der UDP der Russischen Föderation, beteiligten sich an der Entwicklung.

HCD führt ständig innovative Technologien zur Herstellung von MAST-Allergietests ein und führt die neue OPTIGEN-Technologie auf MAST-Basis ein, die die neuesten wissenschaftlichen Fortschritte auf dem Gebiet der In-vitro-Allergiediagnostik verkörpert.

Hauptbestandteil der OPTIGEN-Technologie ist eine kleine Kunststoffprüfkammer, ein High-Tech-Gerät - das sogenannte Panel. Diese Platte besteht aus drei Komponenten: dem Körper der Platte, der Abdeckscheibe und der Trennwand. Das Deckglas besteht aus einzelnen Zellen mit sorbierten Allergenen an der Innenseite und optischen Linsen an der Außenseite, um den Lichtstrom zu verstärken und zu fokussieren.

Hauptbestandteil der OPTIGEN-Technologie ist eine kleine Kunststoffprüfkammer, ein High-Tech-Gerät - das sogenannte Panel. Diese Platte besteht aus drei Komponenten: dem Körper der Platte, der Abdeckscheibe und der Trennwand. Das Deckglas besteht aus einzelnen Zellen mit sorbierten Allergenen an der Innenseite und optischen Linsen an der Außenseite, um den Lichtstrom zu verstärken und zu fokussieren.

Das aus der Blutprobe des Patienten gewonnene Serum wird in die Testkammer des Panels gesaugt. Das Serumallergen IgE bindet an bestimmte Allergene, die innerhalb des Panelkörpers sorbiert werden. Als nächstes werden Reagenzien zu dem Panel hinzugefügt, die ein Lichtsignal mit variierender Intensität und abhängig von der Menge an allergenspezifischem IgE in der Patientenprobe erzeugen. Das Panel-Licht wird mit einem CLA-1-Luminometer gemessen. Die Ergebnisse werden automatisch auf dem eingebauten Drucker gedruckt.

Vorteile von mehreren Tests MAST OPTIGEN:

  • absolute Sicherheit für den Patienten und den Arzt;
  • die Möglichkeit der weit verbreiteten Anwendung in der Pädiatrie;
  • höchste Genauigkeit und Zuverlässigkeit des Ergebnisses aufgrund der Chemilumineszenz-Analysetechnologie;
  • ein Dreifachkontrollsystem (einschließlich einer Steuerkonsole zum Testen des Instruments, 2 Kontrollgewinden an jeder Steuerkonsole zur Beurteilung der Reagenzienqualität, Kontrollseren);
  • Bestimmung der minimalen Konzentrationen an spezifischem IgE (von 0,52 ng / ml oder 0,22 LU / ml);
  • die Fähigkeit, bei 5 Patienten in 8 Minuten bis zu 180 Allergene zu bestimmen;
  • Erhalt der Analyseergebnisse am Tag der Produktion;
  • die minimale Menge an Serum - von 300 μl;
  • Einfachheit, Leichtigkeit und Zuverlässigkeit bei der Handhabung (fehlende Matrizen, Reagenzgläser);
  • Komplettes Set von OPTIGEN-Panels mit allen notwendigen Reagenzien (Puffer, Lösungsmittelkonjugat, Photoreagenzien);
  • 1 Jahr Garantie auf das Gerät, die Möglichkeit der langfristigen Lagerung von OPTIGEN-Platten und Reagenzien;
  • vollautomatisches Studium von OPTIGEN-Panels im Luminometer CLA-1 mit Druckinformationen in praktischer Form;
  • völlige Unabhängigkeit von der Laborbasis. Das CLA-1-Gerät kann sowohl im Diagnoselabor als auch im Büro eines Facharztes leicht installiert werden: Allergologe, Lungenarzt, Kinderarzt, Augenarzt, Dermatologe, Gastroenterologe oder andere interessierte Spezialisten.
  • die Fähigkeit, einzelne Studien (ein Panel für einen Patienten) durchzuführen, ohne die Testkosten zu erhöhen;
  • hohe Systemzuverlässigkeit und keine Wiederholungsprüfungen erforderlich;
  • praktische Kombination von Allergenen in russischen OPTIGEN-Panels;
  • keine aufwendige Wartung des Geräts erforderlich, was für die Zeit nach der Garantie wichtig ist;
  • die Möglichkeit, das Gerät an einen Computer anzuschließen und ein Datenarchiv zu erstellen;

Die Zusammensetzung der Allergenplatten MAST OPTIGEN

OPTIGEN Russisch l

  1. Löwenzahn
  2. Wermut
  3. Quinoa
  4. Hasel (Pollen)
  5. Weiße Birke
  6. Schwarze Erle
  7. Aspergillius
  8. Cladosporium
  9. Kakerlakenmischung, die ich mische
  10. Hausstaub
  11. Timothy
  12. Wiesenschwingel
  13. Igel-Team
  14. Roggen (Pollen)
  15. Hühnchen
  16. Mais (Essen)
  17. Ein apfel
  18. Erdbeeren
  19. Weizen (Essen)
  20. Kartoffeln
  21. Karotte
  22. Cod
  23. Rindfleisch
  24. Schweinefleisch
  25. Tomate
  26. Ganzes Ei
  27. Milch
  28. Haselnuss (Lebensmittel)
  29. Soja
  30. Erbse
  31. Hühnerfeder
  32. Hund (Epid.)
  33. Pferd (Epid.)
  34. Katze (Epid.)
  35. Mite Farina
  36. Mite Pteronissinus

OPTIGEN Russisch IV

  1. Löwenzahn
  2. Wermut
  3. Quinoa
  4. Weiße Birke
  5. Schwarze Erle
  6. Alternaria
  7. Candida
  8. Mukor
  9. Aspergillius
  10. Cladosporium
  11. Penicillium
  12. Kakerlakenmischung, die ich mische
  13. Hausstaub
  14. Timothy
  15. Wiesenschwingel
  16. Roggen (Pollen)
  17. Hühnchen
  18. Hafer
  19. Ein apfel
  20. Erdbeeren
  21. Weizen (Essen)
  22. Kartoffeln
  23. Karotte
  24. Cod
  25. Rindfleisch
  26. Schweinefleisch
  27. Tomate
  28. Ganzes Ei
  29. Milch
  30. Haselnuss (Lebensmittel)
  31. Soja
  32. Hühnerfeder
  33. Hund (Epid.)
  34. Katze (Epid.)
  35. Mite Farina
  36. Mite Pteronissinus

OPTIGEN Inhalation

  1. Erle
  2. Hasel (Pollen)
  3. Weiße Birke
  4. Wermut
  5. Timothy
  6. Roggen (Pollen)
  7. Wegerich
  8. Esche
  9. Penicillium
  10. Alternaria
  11. Cladosporium Aspergillus
  12. Hamster (Epid.)
  13. Meerschweinchen (Epid.)
  14. Kaninchen (Epid.)
  15. Pferd (Epid.)
  16. Katze (Epid.)
  17. Hund (Epid.)
  18. Tick, Farina
  19. Mite, Pteronissinus

OPTIGEN Essen

  1. Krabbe
  2. Cod
  3. Karotte
  4. Ein apfel
  5. Kartoffeln
  6. Tomate
  7. Sellerie
  8. Pfirsich
  9. Walnuss
  10. Erdnüsse
  11. Haselnuss
  12. Mandel
  13. Soja
  14. Roggen
  15. Weizen
  16. Sesam
  17. Kasein
  18. Milch
  19. Eiweiß
  20. Eigelb

OPTIGEN Atopisch

  1. Mite, Pteronissinus
  2. Tick, Farina
  3. Aspergillius
  4. Cladosporium
  5. Pferd (Epid.)
  6. Hund (Epid.)
  7. Katze (Epid.)
  8. Timothy
  9. Wermut
  10. Weiße Birke
  11. Hasel (Pollen)
  12. Eiweiß
  13. Milch
  14. Cod
  15. Weizen
  16. Soja
  17. Erdnüsse
  18. Ein apfel
  19. Karotte
  20. Latex
http://www.luminery.ru/%D0%B0%D0%BB%D0%BB%D0%B5%D1%80%D0%B3%D0%BE0% D0%BB%D0%BE%D0%B3 % D0% B8% D1% 8F /
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