Labormethoden der allergischen Diagnose

Diese Verfahren können bei allergischen Erkrankungen in der Akutphase, in der Zeit des massiven Kontakts mit dem Allergen, mit einer hohen Empfindlichkeit des Patienten gegen das Allergen, bei Kontraindikationen bei Kindern, bei der Erkennung von allergischen Berufskrankheiten breit angewendet werden, da sie die Möglichkeit unspezifischer, falsch allergischer Reaktionen ausschließen.

Zu den Methoden, die eine allergische Reaktion eines unmittelbaren B-abhängigen Typs feststellen, gehören:

a) Bestimmung von Gesamt-IgE (sein hoher Spiegel kann jedoch in der produktiven Phase der Immunantwort sein),

b) Bestimmung von allergenspezifischem IgE und IgG4.

Die IgE- und IgG4-Spiegel werden durch ELISA bestimmt (siehe Klasse 6).

Der Nachweis von IgE und IgG4 wird gegen mehr als 400 Allergene einschließlich Lebensmittelallergene durchgeführt. Allergene gegen Bakterien und Pilze, Tierhaare und Tierhaare, Vogelfedern; Allergene von Gras und Baumpollen; Allergene von Zecken, Haus- und Bibliotheksstaub, Insekten; medizinische und berufliche Allergene.

Gegenwärtig sind Testsysteme entwickelt worden, die eine mehrfache Diagnose von spezifischem IgE ermöglichen. Der mehrfache Allergosorbent-Test mit Chemilumineszenz-Analyse (MAST-CLA oder MAST-Allergotest) ermöglicht die gleichzeitige Bestimmung von bis zu 36 Allergenen mit einer geringen Serummenge (0,75 ml). Für den Test wird das MAAST-Alleropanel verwendet, bei dem es sich um ein hohles transparentes Kunststoffgehäuse handelt, bei dem die dünnsten Zellulosefäden parallel nach innen liegen und an denen Allergene sorbiert werden (Abb. 9.1).

Hinweis: 1 - MAST-Plattenmontage, 2 - Abdeckung,

3 - Cellulosegarn mit adsorbiertem Allergen, 4 - Körper

Abb. 9.1 Prinzip der Chemilumineszenzanalyse während des MAST

Der Kern des MAST-Allergietests besteht darin, die Reaktion der Bindung des Allergens mit spezifischem IgE durchzuführen, gefolgt von der Markierung des resultierenden Komplexes mit einem Photoreagenz und der Bestimmung seiner Lumineszenz, deren Intensität der Konzentration des spezifischen IgE im Patientenserum proportional ist. MAST Alleropanel wird (mit einer herkömmlichen Spritze) mit Patientenserum gefüllt und bei Raumtemperatur für 16 bis 24 Stunden inkubiert. Nach dem Waschen der Platte mit normalem destilliertem Wasser mit einem Puffer wird sie mit einem Konjugat (Peroxidase-markiertem Anti-IgG) gefüllt und 4 Stunden inkubiert. Nach dem Waschen wird die Platte mit einem Photoreagenz gefüllt und in Luminometern analysiert. Das Gerät registriert eine Klasse von Werten von 0 bis 4 entsprechend dem Lumineszenzgrad von jedem einzelnen Filament der Platte. Diese Klassen entsprechen den Klassen von Hautproben. IgE-Spiegel, die den MAST-Allergieklassen und den Luminometer-Werten entsprechen, sind in Tabelle 9.2 dargestellt.

Interpretation der Ergebnisse bei Durchführung eines multiplen Allergietests

Neben dem Nachweis von spezifischem IgE werden andere Labortests verwendet, um sowohl antikörperabhängige als auch verzögerte Reaktionen zu diagnostizieren. Mit diesen Methoden können wir die Pathogenese allergischer Reaktionen untersuchen. Dazu gehören:

- Mastzellen- oder Basophilen-Degranulationsreaktion,

- die Reaktion der Hemmung der Migration von Blutleukozyten (RTML),

- Neutrophilenschadenreaktion (RPN),

- Definition von freiem gebundenem Histamin,

- Bestimmung von IL 4,5,6, TGFb,

- Bestimmung von Tryptase und Chymotryptase (Tryptase, insbesondere die β-Form, kann 4 Stunden nach der anaphylaktischen Reaktion im Blut nachgewiesen werden und dient als klinischer Marker für Anaphylaxie),

- Bestimmung von Leukotrienen (LTC4, LTD4, LTE4) unter Verwendung des Freisetzungstests des Zellmediators,

- Bestimmung der Anzahl der aktivierten Basophilen, die das CD63-Antigen (gp53) auf der Oberfläche als Reaktion auf eine Allergenstimulation exprimieren (zytometrischer Allergen-stimulierender Zelltest, CASC-Test).

Durch die Definition dieser Indikatoren können Sie die individuellen Merkmale des Verlaufs allergischer Reaktionen verstehen, die für die Behandlung eines Patienten wichtig sind.

Der Zelltest für die Freisetzung von Mediatoren basiert auf der Bestimmung von Sulfidol-Leukotrienen (LTC4, LTD4, LTE4), die von Basophilen unter dem Einfluss eines Allergens in vitro sekretiert werden (Abb. 9.2). Es wird auch ein provokativer Test in vitro genannt. Aufgrund der De-novo-Synthese von Sulfidol-Leukotrienen hat dieser Test eine höhere Spezifität als der klassische Histamin-Freisetzungstest. Das Studienprotokoll umfasst drei Schritte:

1) Isolieren der Lymphozytenpopulation aus stabilisiertem Blut-EDTA,

2) Stimulation der Lymphozytensuspension durch spezifische Allergene,

3) Enzymgebundener Immunosorbens-Assay von Leukotrienen, die von Basophilen während der Stimulation synthetisiert werden.

Abbildung 9.2 Prinzip der basophilen Antigenstimulationstests

Der Test gilt als positiv für Lebensmittel, Inhalationsallergene, Latex, Insektengifte bei der Bestimmung des Leukotrien-Gehalts von 200 pg / ml; für Arzneimittelallergene sowie Lebensmittel- und chemische Zusatzstoffe 40 pg / ml.

Die zytometrische Variante des Basophilen-Stimulationstests - ein zytometrisches Antigen, das den Zelltest (CASK-Test) stimuliert, ermöglicht die Bestimmung der Anzahl aktivierter Basophile, die das CD63-Antigen auf der Oberfläche exprimieren. Die Stufen der Lymphozytenisolation und der Stimulation ihrer Antigene für beide Varianten (Enzymimmunoassay und Zytometrie) sind identisch. Anstelle von Sulfidol-Leukotrienen bestimmt die dritte Stufe die Anzahl der aktivierten Basophilen, die das CD63-Antigen (gp53) auf der Oberfläche als Reaktion auf eine Stimulation durch das Allergen exprimieren. Der Test ist hochempfindlich und spezifisch für Reaktionen des anaphylaktischen Typs, insbesondere für Arzneimittelüberempfindlichkeit.

Im CASK-Test werden isolierte Leukozyten mit einem stimulierenden Puffer und einem Allergen inkubiert. Dann wird monoklonaler Anti-IgE-Antikörper mit fluoreszierender Markierung hinzugefügt, um Basophile zu identifizieren. Dann werden monoklonale Antikörper zu CD63 hinzugefügt (siehe Abb. 9.2). Die Expression von CD63 AH wird auf der Basophilenoberfläche durch Durchflusszytometrie bestimmt. Beispielsweise wird der Test für Nahrungsmittel- und Inhalationsallergene als positiv angesehen, wenn CD63 auf der Oberfläche von 15% der Basophilen exprimiert wird; für Insektengifte - 10%; Beta-Lactam-Antibiotika und Analgetika - 5% Basophile und Stimulationsindex 2. Berechnen Sie den Stimulationsindex, definiert als das Verhältnis von CD63 + Basophilen in der Probe mit Allergen (%) zur Anzahl dieser Zellen in der Probe ohne Allergen (%).

Caska Test ist spezifisch für die Bestimmung von IgE-vermittelten Allergie gegen Inhalationsallergene (bei Hauttests können nicht wegen der Gefahr von Bronchospasmen und Status Asthmaticus durchgeführt werden), Pollen, Medikamente, Beta-Lactam-Antibiotika, Muskelrelaxantien, Analgetika, Allergie gegen Latex, Stiche von Hautflügler Insekten, pseudoallergische Reaktionen auf entzündungshemmende nichtsteroidale Arzneimittel, die durch Komplementkomponenten induziert werden, Plasma, Bestimmung von Autoantikörpern gegen IgE. Die Ergebnisse des CASK-Tests korrelieren gut mit den Ergebnissen von Hauttests.

Beide Tests sind hochspezifisch für die Diagnose von Nahrungsmittelallergien und -intoleranzen, Inhalationsallergien, wenn Hauttests nicht durchgeführt werden können (Latexallergien, Insektenstiche von Hautflügler, Allergien bei Kindern, Arzneimittelallergien und -intoleranzen, verschiedene pseudoallergische Reaktionen).

Mit dem CASK-Test und dem zellulären Test der Freisetzung von Mediatoren bei der Diagnose von Nahrungsmittelallergien und -intoleranzen können pseudoallergische Reaktionen zur Erstellung einer hypoallergenen und Eliminationsdiät verwendet werden.

Diagnose pseudoallergischer Reaktionen. Pseudoallergische Reaktionen bei klinischen Symptomen mögen den durch IgE vermittelten Reaktionen ähneln, unterscheiden sich jedoch in ihrem Entwicklungsmechanismus. Ihre Entwicklung steht nicht im Zusammenhang mit der Produktion von Ab oder der Beteiligung sensibilisierter Lymphozyten. Bei der Pathogenese dieser Reaktionen gibt es nur zwei Stadien - pathochemische und pathophysiologische. In dieser Hinsicht liegt bei diesen Patienten die Serumkonzentration von IgE normalerweise im normalen Bereich.

Bei pseudoallergischen Reaktionen kommt es jedoch zu einer unspezifischen Freisetzung von Mediatoren: Histamin, Leukotriene, Prostaglandine. Für die Diagnose pseudoallergischer Reaktionen wird daher der CASA-Test verwendet, um aktivierte Basophile und zelluläre Tests der Freisetzung von Mediatoren nachzuweisen, um die Konzentration von LTC4, LTD4 und LTE festzustellen.

http://studopedia.org/12-101069.html

DIAGNOSTIKMETHODEN IN VITRO

Die Hauptindikationen sind:

- frühe Kindheit;

- eine hohe Sensibilisierung der Patienten;

- kontinuierlich rezidivierender Krankheitsverlauf ohne Remissionsperioden;

- die Unfähigkeit, Antihistaminika und andere Drogen abzusetzen;

- polyvalente Sensibilisierung, wenn in einem begrenzten Untersuchungszeitraum keine gleichzeitige In-vivo-Untersuchung mit allen vermuteten Allergenen möglich ist;

- stark veränderte Hautreaktivität;

- falsch-positives oder falsch-negatives Ergebnis beim Hauttest;

Die wichtigsten Vorteile spezifischer In-vitro-Diagnosemethoden sind:

- Sicherheit für den Patienten;

- hoher Standard und Reproduzierbarkeit;

- die Möglichkeit einer quantitativen (digitalen) Rechnungslegung;

- die Möglichkeit der Forschung in dem Fall, in dem sich der Patient in größerer Entfernung vom Allergologen befindet und nur das Patientenserum geliefert wird;

- eine kleine Menge Blut für die Forschung.

Moderne Methoden zur In-vitro-Diagnose allergischer Erkrankungen sind in der Tabelle dargestellt. 1

Moderne Methoden zur In-vitro-Diagnostik allergischer Erkrankungen

Methoden zur Bestimmung des gesamten IgE-Serums im Blutserum

Die Konzentration von IgE im Serum gesunder Menschen ist in der Tabelle dargestellt. 2

Bei allergischen Reaktionen vom Soforttyp steigt der IgE-Gesamtwert im Blutserum in der Regel an, in einigen Fällen kann dieser Indikator jedoch der Norm entsprechen. Säuglinge mit einem hohen IgE-Spiegel haben jedoch ein erhöhtes Risiko für die Entwicklung von Allergien. Atopische Erkrankungen betreffen 95% der Kinder mit hohem IgE-Spiegel. Bei etwa 70% der Erwachsenen mit Patienten mit exogenem Asthma und allergischer Rhinitis liegt der IgE-Spiegel um zwei Standardabweichungen über dem Standard. Besonders hohe IgE-Spiegel (mehr als 1000 IE / ml) werden bei diffuser Neurodermitis und atopischen Erkrankungen des Atmungssystems festgestellt.

Die Konzentration von IgE im Serum gesunder Menschen

Hochempfindliche immunologische Studien, die auch geringe IgE-Konzentrationen (weniger als 50 IE / ml) nachweisen können, sind:

1. Immunassay (ELISA). Um den Gesamtgehalt an IgE zu quantifizieren, wird ein Festphasen-ELISA verwendet (6), bei dem Antikörper gegen IgE an einem festen Träger adsorbiert werden, beispielsweise in Vertiefungen einer Polystyrolplatte. Der bei der Verabreichung des Testserums gebildete Komplex wird durch Zugabe der entsprechenden mit der Enzymmarkierung konjugierten Antikörper (Meerrettichperoxidase, Beta-Galactosidase oder alkalische Phosphatase) nachgewiesen.

Das Prinzip der Einstellung des ELISA zur Bestimmung von IgE

Nach dem Kombinieren des Antigens mit dem Enzym-markierten Immunserum wird das Substrat / Chromogen zu der Mischung gegeben. Das Substrat wird durch das Enzym gespalten und die Farbe des Reaktionsprodukts ändert sich; Die Farbintensität ist direkt proportional zur Anzahl der gebundenen Antigenmoleküle und markierten Antikörper. Ein positives Ergebnis verändert die Farbe des Chromogens. Nach jeder Zugabe der nächsten Komponente werden ungebundene Reagenzien durch Waschen aus den Vertiefungen entfernt. Die Berücksichtigung der Reaktionsintensität der Versuchs- und Kontrollproben erfolgt auf einem Platten-Spektrophotometer (ELISA-Reader) nach der Lichtabsorption mit einer bestimmten Wellenlänge (für das TMB-Chromogen (Tetramethylbenzidin) 450 nm).

2. Chemilumineszenz ("Sandwich") - Analyse unter Verwendung einer paramagnetischen Markierung.

Anti-IgE-AT, markiert mit einer Lumineszenzmarkierung (Acridinester), wird zum Patientenserum gegeben. Nach dem Waschen nicht gebundener Antikörper werden Anti-IgE-Antikörper zugesetzt, die kovalent an paramagnetische Partikel gebunden sind. Um dies zu berücksichtigen, wird ein spezielles Messgerät benötigt, das ein Photometer und eine Elektrode mit einem Magneten umfasst. Der Magnet erfasst paramagnetische Partikel, die mit den IgE-Konjugaten assoziiert sind. Als Ergebnis der elektrochemischen Reaktion tritt die Lumineszenz der Markierung auf, die photometrisch gemessen wird. Beispiele solcher Vorrichtungen sind ACS: 180 (Ciba Corning Diagnostics Corp.), NPD (Calgon Vestal Laboratories), Clorox (Clorox Company). Die Methode ist hochempfindlich und ermöglicht die Bestimmung der Gesamt-IgE-Konzentration im Bereich von 1,5-3000 kE / l.

3. Radioimmunanalyse (RIA) ist eine Methode, die auf der Markierung einer der Komponenten einer immunologischen Reaktion (Antigen oder Antikörper) mit dem radioaktiven Isotop I125 basiert. Um den Gesamt-IgE-Gehalt zu quantifizieren, wird ein indirekter oder kompetitiver Festphasen-RIA verwendet (an der Festphase werden Capture-Anti-Human-IgE-Antikörper immobilisiert). Im letzteren Fall werden dem Patienten gleichzeitig das Serum des Patienten und eine bestimmte Menge an IgE-markiertem I125 zugesetzt. Durch die Reaktion erfolgt die Bindung dieser Komponente umgekehrt proportional zum IgE-Gehalt im Patientenserum. Die Ergebnisse werden mit einem Gammazähler auf die Radioaktivität der resultierenden Immunkomplexe ausgewertet.

Da RIA teure Geräte und Reagenzien sowie Bedingungen für das Arbeiten mit radioaktiven Isotopen erfordert, wird dies derzeit wenig genutzt.

In der modernen Praxis angewandte Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE im Serum

Hochempfindliche und spezifische Methoden zur Bestimmung von allergenspezifischen IgE-Antikörpern sind PAST, MAST, Immunoblotting, Festphasen-ELISA, Microarray.

Der RAST-Test (Radioallergic Sorbent Test) ist eine Methode zur Bestimmung spezifischer IgE-Antikörper im Patientenserum gegen ein zuvor auf einem porösen Träger sorbiertes Allergen (Abb. 7).

Ein unlösliches Polymer wird in das Patientenserum eingeführt - ein allergenes Konjugat, das die Antikörper bindet, die für das verwendete Allergen spezifisch sind. Als nächstes füge Antiglobulinserum (Anti-IgE) hinzu, das mit einem radioaktiven Isotop markiert ist. Nach dem Waschen ungebundener Reagenzien werden die Ergebnisse unter Verwendung von Gammazählern hinsichtlich der Radioaktivität der gebildeten Immunkomplexe im Vergleich mit der Kontrolle und der Standardkurve bewertet.

Die Bestimmung von spezifischem IgE mit Hilfe von PACT zeigt ein hohes Risiko für anaphylaktische Reaktionen, Hautläsionen und -behandlung, was die Ergebnisse von Hauttests beeinflusst.

Gegenwärtig sind RAST der dritten Generation weit verbreitet, die sich durch hohe Empfindlichkeit und Spezifität, Automatisierung, Verwendung von Fluorochrom, Enzymmarkierungen oder Chemilumineszenz auszeichnen.

Das Prinzip der Einstellung von RAST (von L. Wide)

Bestimmung von allergenspezifischem IgE in PACT mit Fluoreszenzmarker

Fügen Sie dem auf dem Celluloseträger sorbierten Allergen das Serum des Patienten hinzu. Dann werden enzymmarkierte (& bgr; -Galactosidase) anti-IgE-AT, die an das resultierende Konjugat binden, zugegeben. Nach dem Waschen ungebundener Antikörper wird ein Substrat hinzugefügt (4-Methylimbelliferyl- & alpha; -D-galactosid), bei dessen Fermentation fluoreszierende Substanzen gebildet werden, deren Konzentration mit einem Lesegerät (FluoroCount) nachgewiesen wird.

Als Beispiel für eine Methode, die auf dem Effekt der Chemilumineszenz basiert, kann MAST angegeben werden.

MACT (Multiple Allergie Testing Test) ist ein Verfahren zur Bestimmung von allergenspezifischem IgE, ähnlich dem PACT-Prinzip, bei dem das Allergen an Cellulosefilamenten sorbiert wird und auf einem Luminometer Photoreagenzien, deren Lumineszenz auf einem Polaroidfilm aufgezeichnet wird, auf einem Photometer verwendet werden (8).. Die Methode ermöglicht es Ihnen, die Ergebnisse der Studie schnell zu erhalten, die notwendigen Parameter selbst bei einem Patienten zu bestimmen, ohne auf die Ansammlung von Proben warten zu müssen, um den gesamten Satz zu verwenden.

Gerät zum Einstellen von MAST

1 - MAST-Plattenmontage; 2 - Abdeckung; 3 - Cellulosegarn mit adsorbiertem Allergen; 4 Körper

Pseudoimmunoblot - eine Methode, mit der Sie gleichzeitig spezifische IgE-Antikörper für das Spektrum von Allergenen (jeweils eines) in Serum oder anderem Material nachweisen können. Der Pseudoimmunoblot basiert auf Festphasen-ELISA, hat jedoch im Gegensatz zu letzterem eine größere Spezifität (aber weniger Empfindlichkeit), Ausführungsgeschwindigkeit, minimales Blutvolumen (weniger als 0,5 ml), Möglichkeit des gleichzeitigen Tests mit einer großen Anzahl von Allergenen (etwa 20 in jeder Gruppe).. Außerdem wird jetzt ein Programm zur hochpräzisen Verarbeitung der Ergebnisse angewendet.

Moderne Testsysteme basieren auf dem Prinzip einer zweistufigen Definition des Allergenstatus: Auf der ersten Ebene wird eine Standard-Allergieuntersuchung durchgeführt, mit deren Hilfe die Allergengruppe ermittelt werden kann, für die eine Sensitivität besteht. Danach ist es möglich, eine erweiterte (genauere und komplexere) Bestimmung der Empfindlichkeit gegenüber einem bestimmten Allergen durchzuführen.

Der klassische Immunoblot wird bei eindeutigen Hinweisen auf ein ursächliches Allergen (Daten aus Anamnese, Ausscheidungstest usw.) und bei negativen Testergebnissen für spezifisches IgE mit den charakterisierten Bestandteilen dieses Allergens verwendet. In solchen Fällen werden Blots aus einem groben Allergenextrakt erhalten und das Patientenserum wird auf das Vorhandensein von IgE analysiert, das für die Nebenkomponenten (nicht charakterisiert) des Allergens spezifisch ist.

Microarrey (Microarrey) ist eine relativ neue (in den 1990er Jahren entwickelte) und vielversprechende Richtung in der angewandten Molekularbiologie. Gegenwärtig hat die auf DNA-Oligonukleotiden basierende Mikroray-Technologie die meiste Aufmerksamkeit auf sich gezogen, aber der Micro-Ray entwickelt sich auch unter Verwendung von monoklonalen Antikörpern und rekombinanten Antigenen. Diese Technologie wird insbesondere zur Diagnose und Optimierung der Behandlung von Allergien eingesetzt (Abb. 9).

Mikroarray-Schema zur Diagnose von Allergien

Die Studie wird in mehreren Schritten durchgeführt:

1. Vorbereitung des Mikrochips: Rekombinante Allergene werden auf der Oberfläche eines aktivierten Glasträgers ausgegraben (Tropfenvolumen ist Nanoliter, Antigenmenge ist Dutzende Pikogramme). Ein Glas enthält 12 Zellen. Jede Zelle enthält Dutzende (Hunderte) verschiedener Allergene und eine Kalibrierungskurve (steigende IgE-Mengen) in Tripletts.

So können bis zu 12 Patienten gleichzeitig untersucht werden.

a) Ausgraben von Patientenseren (15 μl);

b) Inkubation (IgE des Patienten bindet an Allergene);

c) die Zugabe von mit Fluorochrom markierten monoklonalen Anti-IgE-Antikörpern;

d) Scannen des Mikrochips;

e) typisches Mikrochip-Scanogramm:

- die ersten drei Reihen = Kalibrierungskurve (die Intensität des Glühens ist proportional zur Anzahl der festen IgE);

- ferner - das Sensibilisierungsprofil des Patienten (Spezifität und Menge an IgE im Patientenserum).

Tests der Zellaktivierung mit Allergenen (CAST) sind moderne Methoden zur Diagnose des GST-Mediator-Typs, die nicht durch IgE verursacht werden (10).

Das Prinzip der Einstellung von CAST / FAST

1 - Basophilenstimulation (IgE-abhängig unter Verwendung eines Allergens; unter Verwendung von Anti-FceRI-Antikörpern; IgE-unabhängig unter Verwendung von Nahrungsmittelzusätzen, nichtsteroidale entzündungshemmende Arzneimittel (Aspirin), Arzneimittel); 2 - Identifizierung von Basophilen. Nur für FAST durchgeführt, normalerweise mit Hilfe markierter Antikörper gegen IgE- oder Chemokinrezeptoren CCR3; 3 - Bericht über die Reaktion. CAST wird durch quantitative Bestimmung von Leukotrienen (Typ) berücksichtigt. FAST - durch Bestimmung des Prozentsatzes von aktivierten Basophilen (CD63 exprimierend) unter Verwendung von Cytofluorimetrie

Zuvor war eine ähnliche Reaktivität in Tests auf Leukozytenschädigung und Stimulierung der Histaminfreisetzung durch Basophile festzustellen, sie sind jedoch zu umständlich, schlecht reproduziert und für eine Standardisierung nicht geeignet. СAST / FAST wird in mehreren Schritten abgelegt:

1. Isolierung von Blutleukozyten:

a) Zugabe von Dextran zum stabilisierten Blut, um Erythrozyten auszufällen;

b) der Überstand wird zentrifugiert, um Leukozyten auszufällen (Entfernung von Dextran und Blutplättchen);

c) Leukozytenpellet wird in einer Pufferlösung resuspendiert, die IL3 enthält.

2. Stimulation von Leukozyten

a) mit Anti-FceRI-Antikörpern (Positivkontrolle);

b) Kochsalzlösung (Negativkontrolle);

c) Allergene in verschiedenen Konzentrationen.

3. Die Überstände werden ausgewählt und der Leukotriengehalt wird sofort durch Festphasen-ELISA bestimmt. Für die Quantifizierung müssen mehrere Verdünnungen von Standards zum Erstellen einer Kalibrierungskurve verwendet werden.

4. Interpretation des Tests. Bei Nahrungsmittelallergenen beträgt der untere (Schwellenwert) (Grenzwert) normalerweise 400 pg / ml; für Lebensmittelzusatzstoffe, Medikamentenallergene, Luftallergene - etwa 40 pg / ml.

FAST unterscheidet sich von CAST in der Zählweise der aktivierten Basophilen: der Nachweis und die Zählung des Prozentsatzes von Zellen, die CD63 und assoziiertes IgE exprimieren (Fig. 11). Zellen, die für uns von Interesse sind, sollten an die Oberfläche gebundenes IgE aufweisen, d. H. Mit FITC markierte Anti-IgE-Antikörper binden und stark grün leuchten. Aktivierte Mastzellen exprimieren zusätzlich CD63, binden mit PE markierte Anti-CD63-Antikörper und leuchten rot. Der Test ist also positiv, wenn im zweiten Quadranten ein signifikanter (> 5–15%) Prozentanteil der Zellen (Punkte in der Grafik) gefunden wird. Derzeit gibt es handelsübliche Kits für die Formulierung kombinierter Tests (CAST und FAST in einem Reagenzglas).

Es sei darauf hingewiesen, dass CAST / FAST die Leukotrien-Sekretion durch Leukozyten sowohl in Verbindung mit als auch ohne die Anwesenheit von allergenspezifischem IgE zeigt. Hauptindikationen für die Verwendung von CAST / FAST: Verdacht auf den Typ des GNT-Mediators und das Fehlen von spezifischem IgE; das Vorhandensein einer Überempfindlichkeit gegen Lebensmittelzusatzstoffe und Arzneimittelallergene; Diagnose von Aspirin-Asthma und ähnlichen Erkrankungen. CAST / FAST werden nicht als Tests für allergologische Primäruntersuchungen empfohlen (sie sind schwieriger, teurer und unterlegen gegenüber Standardtests zum Nachweis von spezifischem IgE (UniCAP usw.)).

a - Negativkontrolle; b - positive Kontrolle. Bezeichnungen: PE-Phycoerythrin (rotes Glühen); FITC - Fluorescein (grün); Q1-4 - Quadranten im Zellverteilungsdiagramm (Q1 - starkes rotes Glühen, schwach grün; Q2 - starkes Rot und starkes Grün; Q3 - schwach rot und schwach grün; Q4 - schwach rotes und starkes grünes Glühen)

Methoden zur Erforschung pro-allergischer Zytokine und Mediatoren der Immunentzündung.

Bestimmung von Mediatoren und Cytokinen im systemischen Kreislauf (üblicherweise nach der Festphasen-ELISA-Methode):

1. Der Nachweis von Histamin ist aufgrund der extrem hohen Inaktivierungsrate (Minuten) schwierig. Daher wird der Nachweis von Methyl-Histamin im Urin häufiger für den Nachweis seines Vorhandenseins im systemischen Kreislauf verwendet (anaphylaktischer Schock) (hoher Spiegel bleibt mehrere Stunden nach dem Verschwinden einer systemischen Anaphylaxie bestehen).

2. Bestimmung der Tryptase im Serum. Tryptase ist in Mastzellgranulat enthalten und wird lange (mehrere Stunden) im Kreislauf gehalten.

3. Die Bestimmung des Cytokinstatus des peripheren Blutes (IL4, IFN & sub3 ;, IFN & sub2; / IL4) gibt eine sehr allgemeine Vorstellung von der Art der Reaktion des Immunsystems zum Zeitpunkt des Tests. Es war in den 80ern populär. des letzten Jahrhunderts. Später - in den 90ern. Das Th1 / Th2-Modell ist der Untersuchung der Rolle von T-Regulatoren bei Allergien gewichen.

4. Bestimmung des Inhalts von Zellen, die bestimmte Zytokine sekretieren. Derzeit ist es möglich, diese Parameter für allergenspezifische Zellen zu bestimmen (Tetramer-Technologie). Für diese Zwecke werden häufig Durchflusszytofluorimetrie und Alispot verwendet.

Bestimmung von Zytokinen und Mediatoren in Geweben (ermöglicht es Ihnen, die Art der Entzündung, ihre Intensität und die vorherrschende Pathogenese festzustellen):

1. Definition von NO in der ausgeatmeten Luft: Ein einfacher nichtinvasiver Test, mit dem Sie die Intensität des Entzündungsprozesses in den Atemwegen verfolgen können (Überwachung der Behandlung von Bronchialasthma).

2. Bestimmung von Mediatoren und Zytokinen in Waschlösungen, Exsudaten und anderen abnehmbaren beschädigten Geweben.

3. Identifizierung von Zellen, die Zytokine und Mediatoren auf Abschnitten von Biopsien beschädigten Gewebes synthetisieren.

4. Quantitative Bestimmung der mRNA von Cytokinen und Mediatoren in Waschlösungen, Abfällen und Biopsiematerial.

Es wird darauf hingewiesen, dass die Methoden zur Bestimmung von Cytokinen in allergischen Prozessen hauptsächlich für wissenschaftliche Zwecke verwendet werden.

Tests von historischer Bedeutung

Shelley / Schwartz-Test - Basophil / Mastzell-Degranulation in Gegenwart eines spezifischen Allergens. Der Test wurde in der Labordiagnose von allergischen Erkrankungen des GNT-Typs I weit verbreitet.

Indirekter basophiler Test (Shelley-Test). Dieser Test basiert auf der Untersuchung der morphologischen Veränderungen von Basophilen infolge der Interaktion des Patientenserums mit einem bestimmten Allergen. Neutralroter Farbstoff färbt basophile Granulate selektiv in ziegelroter Farbe, wodurch sie von anderen Zellen unterschieden werden können. Die Reaktion wird unter einem Mikroskop mit einem Tauchsystem beobachtet. Unveränderte Basophile haben eine abgerundete Form; Die farbigen Körnchen befinden sich innerhalb der Zelle. Die positive Reaktion äußert sich in der Verformung der Zellen, der Bildung von Pseudopodien, der verstärkten Bewegung der Granula und in seltenen Fällen der Freisetzung der Granula aus der Zelle mit ihrem Bruch. Jedes Präparat hat 40 Basophile, der Prozentsatz an morphologisch veränderten Zellen wird sowohl im Experiment als auch in der Kontrolle berechnet.

Ordnen Sie bedingt 3 Reaktionsgrade zu: schwach (der Prozentsatz der veränderten Basophilen im Versuch übersteigt den in der Kontrolle um 10%), moderat (um 15%), stark positiv (um 20% oder mehr). In allen Fällen bezieht sich dies auf die Ergebnisse der Kontrolle mit der höchsten unspezifischen Reaktion der Basophilen.

Direkter basophiler Test (Shelley-Test). Dieser Test basiert auf der Untersuchung der morphologischen Veränderungen in den Basophilen des peripheren Bluts eines Patienten mit einer allergischen Erkrankung bei der Interaktion mit einem bestimmten Allergen. Die Bewertung der Reaktion wird ähnlich wie die Bewertung mit einem indirekten basophilen Test durchgeführt.

Die Reaktion von Granulozytenschäden (RPG), der Neutrophilenschädigungsindex (PPN), die Reaktion der Freisetzung von Kalium aus Leukozyten, Enzymen usw. Im Rahmen dieses Ansatzes gibt es eine Vielzahl von Methoden. Beispielsweise werden isolierte Leukozyten für eine bestimmte Zeit mit einer Allergenlösung inkubiert, woraufhin Schäden an Neutrophilen aufgezeichnet werden:

- morphologisch: durch Veränderung der Morphologie, durch Anfärben mit Trypanblau, Ethidiumbromid usw. (beschädigte / tote Zellen werden angefärbt);

- photometrisch: Die Zunahme der Kaliumionenkonzentration wird auf einem Flammenphotometer bestimmt, die Freisetzung von Myeloperoxidase wird durch die Fermentation des Substrat-Chromogens und die Änderung der Farbe der Lösung auf einem Tablettenphotometer bestimmt.

Die Reaktion der Freisetzung von Histamin aus Basophilen des menschlichen peripheren Bluts beruht auf der Berücksichtigung der Freisetzung von Histamin nach Behandlung von Basophilen mit spezifischen Allergenen. Stimulanzien für die Histaminfreisetzung aus Zellen sind Allergene, Anti-IgE, C5a. Eine Reihe von Cytokinen - IL-3, IL-5, CSF-GM - erhöhen die Freisetzung von Histamin durch Basophile. Der Test wurde verwendet, um den Sensibilisierungsgrad des Organismus in vitro bei Urtikaria, atopischer Dermatitis und in experimentellen Studien zu ermitteln.

Tests, die nicht zur Verwendung und / oder Interpretation empfohlen werden:

1. Definition von IgG, einschließlich IgG4 (außer wenn es darauf ankommt).

2. Kinesiologie (Metrie) - Kontakt (Demonstration) eines Patienten mit einem Allergen und gleichzeitige Messung der relativen Muskelkraft. Wenn ein ursächliches Allergen gefunden wird, verringert sich die Stärke. Wenn ein bestimmtes Gegenmittel entdeckt wird, wird es wiederhergestellt.

3. VEGA (Elektrothermometrie, Volltest) - Messung der Haut (Gewebe) -Widerstand zwischen Akupunkturpunkten bei gleichzeitiger Berührung (Demonstration) mit einem Allergen. Es gibt kommerzielle Geräte und Testsysteme.

4. Auriculocardial Reflex - Messung von Blutfüllungsparametern / Puls usw. im Moment des Kontakts mit einem Allergen.

5. Test-Provokationsneutralisation: Produktion von Haut- oder anderen Proben mit einer allmählichen Erhöhung der Allergenkonzentration, um eine ausgeprägte Reaktion zu erreichen. Auflösungskonzentration finden. Legen Sie anschließend die Probe und reduzieren Sie die Konzentration des Allergens allmählich, bis die Reaktion verschwindet. Diese Konzentration kann zur gezielten Desensibilisierung verwendet werden.

6. Analyse der Blutreaktion: Ein Tropfen Blut wird mit Allergen- / Lebensmittellösungen usw. gemischt. Nach einiger Zeit werden Änderungen im experimentellen Tropfen mikroskopisch mit der Kontrolle verglichen.

7. Iridologische Allergie.

8. Diagnose von Allergien gegen gestörte Zirkulation verschiedener mystischer Energieformen des menschlichen Körpers oder Geistes.

http://med-books.info/immunologiya-allergologiya_745/metodyi-diagnostiki-vitro.html

Neue Richtungen in der Diagnose allergischer Erkrankungen

Gegenwärtig ist das Problem allergischer Erkrankungen aufgrund ihrer Verbreitung sehr akut, insbesondere wird die Inzidenz allergischer Rhinitis zu einer Epidemie [3, 6, 8]. Es ist kein Zufall, dass die von A. D.

Gegenwärtig ist das Problem allergischer Erkrankungen aufgrund ihrer Verbreitung sehr akut, insbesondere wird die Inzidenz allergischer Rhinitis zu einer Epidemie [3, 6, 8]. Es ist kein Zufall, dass die von A. D. Ado gegründete Hausschule für Allergologen der Prävention und Diagnose allergischer Erkrankungen große Aufmerksamkeit widmete [3].

Zu präventiven und diagnostischen Zwecken sollten folgende Maßnahmen ergriffen werden:

  • Geschichte nehmen;
  • Labordiagnostik allergischer Erkrankungen: Scarification, Prick and Contact Hauttests, intradermale Tests, Bestimmung von allgemeinen und spezifischen Immunglobulinen (Ig) E, zytometrischer Allergen-stimulierender Zelltest (CASK-Test), Zelltest zur Freisetzung von Mediatoren, Test zur Hemmung der natürlichen Leukozytenemigration (TTEEL), ein gemessener Belastungstest für die Diagnose einer physischen Urtikaria;
  • Zytologische und bakteriologische Untersuchung von Nasen- und Rachenabstrichen;
  • Beobachtungsstelle in einer medizinischen Einrichtung, einschließlich der Anwesenheit einer Karte oder Krankengeschichte, eines Reisepasses eines Patienten mit einer allergischen Erkrankung;
  • Beseitigung von Allergenen, was darauf hindeutet:

- die Verwendung von Luftreinigern, speziellen Staubsaugern;

- die Verwendung von Anti-Milben-Kontrollmitteln (Acarosan, Milbiol, Acaril, Acarex-Test);

- Austausch von Kissen, Decken, Matratzen für synthetische Matratzen, Verwendung spezieller Matratzenbezüge, Kissenbezüge, Bettbezüge, Verhinderung des Kontakts mit Mikrosäcken;

- Wohnortwechsel während der Exposition gegenüber Allergenen (insbesondere Pollenallergenen);

- Einhaltung einer hypoallergenen Diät.

Diese Maßnahmen ermöglichen es Ihnen, eine allergische Erkrankung frühzeitig zu diagnostizieren, was zur Vorbeugung und wirksamen Behandlung dieser Erkrankung beiträgt.

Laut verschiedenen Autoren leiden 10–30% der Bevölkerung in verschiedenen Ländern an allergischen Erkrankungen. Nach Angaben des Staatlichen Forschungszentrums des Moskauer Instituts für Immunologie suchen jährlich rund 40.000 Patienten eine ambulante Behandlung von Allergien. In den letzten Jahren wurde eine Zunahme der Inzidenz von Pollinose und allergischer Rhinitis beobachtet.

Dank der Entdeckung von S. Johansson und H. Bennich von Immunglobulinen der Klasse E (IgE) im Jahr 1967 wurden Testsysteme zur Bestimmung allgemeiner und allergenspezifischer IgE erstellt. Diese Art von Tests verringert nicht die Bedeutung von Hautskarifikationen und Pricktests. Sie werden zur Bestimmung ursachlicher Allergene vor einer allergenspezifischen Immuntherapie (ASIT) verwendet. In einer bestimmten Kategorie von Patienten (Patienten mit allergischen Dermatosen; Patienten, die Antihistaminika oder Kortikosteroide erhalten; Kinder mit niedriger Hautempfindlichkeitsschwelle; schwangere Frauen mit unspezifischer Hautsensitivität), ist es schwierig, Hauttests durchzuführen. Allergische Reaktionen, an deren Entwicklungsmechanismus IgE beteiligt ist, werden als wahr oder IgE-vermittelt bezeichnet.

Die Auswahl von Testsystemen verschiedener Produktion für die Bestimmung einer quantitativen oder semi-quantitativen Methode mit Allergenspezifischem und Gesamt-IgE basierend auf einem Enzymimmunoassay (ELISA) oder einem Chemilumineszenz-MAST-Test ist derzeit recht groß. Die quantitative Methode zur Bestimmung des Gesamt-IgE ist gut etabliert. Bei der semi-quantitativen Methode wird das allergenspezifische IgE in Abhängigkeit von der Intensität der Reaktion nach ungefähr den Hauttests entsprechenden Klassen bewertet (Grad 1 - geringe Intensität; Grad 2 - mittel; 3 - hoch; Grad 4 - sehr hoch). Die Intensität der Reaktion der 1. Klasse wird nicht als positives Ergebnis berücksichtigt.

Nach Ansicht vieler Forscher ist der MAST-Test (die Firma Lumineri) empfindlicher und spezifischer, ermöglicht es Ihnen, die Ergebnisse der Studie schnell zu erhalten, die notwendigen Parameter selbst bei einem Patienten zu bestimmen, ohne auf eine Reihe von Proben warten zu müssen. Ein Beispiel für eine quantitative Methode sind solche Testsysteme (Biokhimmak), mit denen Sie die quantitativen Parameter von allergenspezifischem IgE anhand einer Kalibrierungskurve bestimmen können.

Die Ergebnisse von Hauttests stimmen nicht immer mit den Ergebnissen der Bestimmung von spezifischem IgE überein, das mit komplexeren Mechanismen der Bildung der Hautreaktion verbunden ist. Parallele Untersuchungen der Ergebnisse von Hauttests und des MAST-Tests zeigen laut L. A. Goryachkina, A. S. Demborinskaya eine hohe Korrelation (Tabelle) [2].

Die Diskrepanz zwischen den Ergebnissen von Hauttests und dem MAST-Test bezieht sich auf Pilz- und Nahrungsmittelallergene, die auf komplexere Reaktionsmechanismen dieser Allergene zurückzuführen sein können. Nach Aussage von L. V. Luss wurden in 6,4% der Fälle falsch positive Ergebnisse bei der Anwendung des MAST-Tests beobachtet, was möglicherweise mit kreuzreagierenden Allergenen zusammenhängt [4].

Im Jahr 1967 wurden Kontakthäutetests von einer internationalen Autorengruppe standardisiert [11]. Kontaktdermatitis bezieht sich auf Überempfindlichkeitsreaktionen vom Typ IV (Überempfindlichkeit vom verzögerten Typ) und durchläuft in ihrer Entwicklung die Induktionsphasen (Sensibilisierung) und die klinischen Manifestationen. Die Rolle von Allergenen kann hier durch niedermolekulare Proteine, Metallsalze, Haptene, Medikamente erfüllt werden. Sensibilisiertes Th-1 (CD4 + -Zellen) produziert γ-Interferon (IFN), das zur Aktivierung von Keratinozyten, Expression von HLA-DR, intrazellulären Adhäsionsmolekülen - ICAM-1-Antigenen, Produktion von Interleukin-2 (IL-2) und anderen führt proinflammatorische Zytokine, Vasodilatation und die Entwicklung lokaler Entzündungen. Bei Kontakthauttests werden chemische Verbindungen (Allergene, Nickelsulfat, Neomycin, Formaldehyd usw.) auf Gelplatten (Polyvinylpyrrolidon, Hydroxypropylcellulose) aufgebracht, die auf dem Rücken des Patienten befestigt sind. Die Standardplatte enthält 24 Allergene (Pharmazie), die effektive Dosis wird in µg / cm 2 gemessen. Für den Kontakt mit in Petrolat oder Öl, Wasser usw. gelösten flüssigen Allergenen wurden spezielle Streifen entwickelt. Bei allergischer Dermatitis bleibt der Allergenkontakt mit der Haut 48 Stunden lang bestehen. Danach entfernen und analysieren die Streifen das Ergebnis (Größe der Plaque an der Kontaktstelle). Die Bewertung der Reaktion wird wie folgt durchgeführt: - keine Reaktion; ± - nur Erythem; + - Erythem und Infiltration; ++ - Erythem und nicht mehr als drei Papeln; +++ - Erythem und mehr als vier Papeln; ++++ - Erythem und viele ausgeprägte Papeln; +++++ - Erythem, Vesikel. Der Test wird zur Diagnose von Erwachsenen und Kindern verwendet. Die Lesezeit der Ergebnisse kann zwischen 48 Stunden und 7 Tagen variieren (späte Reaktion). Eine echte allergische Reaktion bildet sich in 72–96 Stunden [11].

In unserem Land wurden Applikations- und Tropfenproben entwickelt und angewendet, wenn ein mit einem Allergen behandelter Tropfen eines Allergens oder eines mit einem Allergen behandelten Gaze auf die mit 70% igem Alkohol vorbehandelte Haut des Unterarms aufgebracht wurde [3].

Die Nahrungsmittelunverträglichkeit gegenüber Milch, Eiern und Fischen ist hauptsächlich auf IgG4-Antikörper zurückzuführen [3]. Daher ist die Diagnose von IgG-vermittelten allergischen Reaktionen (Überempfindlichkeitsreaktionen vom Typ II und III), die häufig als Nahrungsmittel- oder Medikamentenunverträglichkeit bezeichnet werden, im Gegensatz zu echten IgE-vermittelten Nahrungsmittel- und Arzneimittelallergien von großer Bedeutung. Das Vorhandensein von Erkrankungen des Gastrointestinaltrakts (GIT) trägt zur Bildung von Nahrungsmittel- und Medikamentenunverträglichkeit bei: Gastritis, chronische Cholezystitis, chronische Pankreatitis, Colitis, Darmdysbiose. Die Bestimmung von IgG-Antikörpern gegen Lebensmittelprodukte mittels ELISA (BIOCHIMMAK, Allergofarma) ist auch bei rezidivierenden Urtikaria, atopischer Dermatitis und gleichzeitigen gastrointestinalen Erkrankungen ratsam. Bei Zöliakie wird eine Nahrungsmittelunverträglichkeit gegenüber glutenhaltigen Produkten (Gliadinprotein) beobachtet.

Der Entwicklungsmechanismus beinhaltet aktivierte T-Zellen, die IL-2 und andere Cytokine (γ-IFN, Tumor-Nekrose-Faktor (TNF-α), IL-1) produzieren, spezifische IgG-, IgM- und IgA-Antikörper werden synthetisiert, was zu erhöhte Permeabilität und Schädigung der Schleimhaut und weiter zur Entwicklung von Atrophie [1].

Die wahren IgE-vermittelten Reaktionen können in der klinischen Symptomatologie den pseudoallergischen Reaktionen ähneln, die sich im Entwicklungsmechanismus unterscheiden: Sie stehen nicht im Zusammenhang mit der Produktion von Antikörpern oder der Beteiligung sensibilisierter Lymphozyten. Bei der Pathogenese dieser Reaktionen werden nur zwei Stadien unterschieden - pathochemische und pathophysiologische [3]. Bei pseudoallergischen Reaktionen kommt es zu einer unspezifischen Freisetzung von Mediatoren: Histamin, Leukotriene, Prostaglandine. Substanz, was zu der Freisetzung von Neurotransmittern, genannt gistaminoliberatorov: 48/80 Substanz, Polyamine, eine Substanz in der Zusammensetzung von denen ihm NH-Gruppe oder aliphatische Bindung N-geksadefilamid, Antibiotika (Polymyxin), Calcium-Ionophoren, Komplement-Fragmente, Blutersatzstoffe, Helminthen Abfallprodukte [3].

Für die Diagnose pseudoallergischer Reaktionen wurden der CAX-Test und der Freisetzungstest für Zellmediatoren (FLOW-CAST und EK-CAST) vorgeschlagen. A. L. DeWeck, M. L. Sanz (2002) zeigten, dass bei Aktivierung von Basophilen mit einem Allergen CD63-Antigene auf ihrer Oberfläche exprimiert werden [7]. Im FLOW-CAST-Test (Buhlmann Laboratories) wird eine Doppelmarkierung verwendet, Leukozyten werden isoliert und mit stimulierendem Puffer und Allergen inkubiert, monoklonale Anti-IgE-Antikörper (MAT) mit einer fluoreszierenden Markierung werden zur Identifizierung von Basophilen verwendet, und dann wird CD63-MAT zugegeben und die Oberfläche von Basophilen bestimmt Expression von CD63-Antigenen durch Durchflusszytometrie. Beispielsweise wird der Test für Nahrungsmittel- und Inhalationsallergene als positiv angesehen, wenn CD63 auf der Oberfläche ≥ 15% der Basophilen ist; für Insektengifte - ≥ 10%; Beta-Lactam-Antibiotika und Analgetika - ≥ 5% Basophile und Stimulationsindex ≥ 2. Der Stimulationsindex ist gleich dem Verhältnis von% CD63 + Basophilen in der Probe mit einem Allergen zu der Anzahl dieser Zellen in der Probe ohne Allergen. Es gibt einen analogen Test FLOW-CAST - BASOTEST (Beckton-Dickinson). Der CASK-Test ist spezifisch für die Bestimmung einer IgE-vermittelten Allergie gegen inhalative Allergene (Hauttests können nicht durchgeführt werden), Pollen [14], Medikamente: β-Lactam-Antibiotika [9], Muskelrelaxanzien [5], Analgetika [5, 12] mit Allergien Latex, Hymenoptera-Insektenstiche [7], mit pseudoallergischen Reaktionen auf entzündungshemmende nichtsteroidale Arzneimittel [12], induziert durch Komplementkomponenten, Plasma, zur Bestimmung von Autoantikörpern gegen IgE [15]. Die Ergebnisse des CASK-Tests (FLOW-CAST) korrelieren gut mit den Ergebnissen von Hauttests.

EC-CAST basiert auf der Bestimmung von Sulfoleukotrienen (LTC)4, LTD4, LTE4), Arachidonsäure-Abbauprodukte, transformiert mit 5-Lipogenase und Glutathion-C-Transferase nach Exposition von Allergenen an Zellen. Sulfoleikriene können durch Basophile, Mastzellen, Makrophagen, Eosinophile, Nierenmesengialzellen nicht nur bei IgE-vermittelten allergischen Reaktionen, sondern auch bei Entzündungsprozessen, Medikamenten- und Nahrungsmittelintoleranz und pseudoallergischen Reaktionen synthetisiert werden. Durch LTC-Zellen synthetisiert4 verstoffwechselt zur Bildung LTD4 und LTE4.

Sulfoleikriene können in verschiedenen biologischen Flüssigkeiten durch ELISA bestimmt werden. Der Test gilt als positiv für Lebensmittel, Inhalationsallergene, Latex, Insektengifte bei der Bestimmung des Leukotriengehalts ≥ 200 pkg / ml; für Arzneimittelallergene sowie Lebensmittel- und chemische Zusätze ≥40 pkg / ml.

Die beschriebenen Tests sind sehr spezifisch für die Diagnose von Nahrungsmittelallergien und -intoleranzen, Inhalationsallergien, wenn Hauttests nicht durchgeführt werden können. Latexallergien, Stechen mit Hymenoptera; Allergien bei Kindern, Medikamentenallergien und -intoleranzen, verschiedene pseudoallergische Reaktionen.

Die gleichzeitige Anwendung beider Tests (CAST-COMBI) ist für die Diagnose von Medikamentenallergien, Nahrungsmittel- und Medikamentenunverträglichkeiten, pseudoallergischen Reaktionen, bei der Bestimmung von Sulfoleukotrienen im Überstand und bei Basophilen - der Expression von CD63-Antigenen möglich [13]. Dieser Ansatz erlaubt es, die Sensitivität und Spezifität der Studie im Durchschnitt um bis zu 20% zu erhöhen. Der CASK-Test und der zelluläre Test der Freisetzung von Mediatoren können bei der Diagnose von Nahrungsmittelallergien und -intoleranzen, bei pseudoallergischen Reaktionen sowie bei der Zubereitung einer hypoallergenen und Eliminationsdiät eingesetzt werden.

Literatur
  1. Belmer S. V. Zöliakie // Brustkrebs. 1996. Band 4 Nr. 3.
  2. A. Goryachkina, A. Demborinskaya A. Bestimmung des Gesamt- und spezifischen IgE im Blutserum von allergischen Patienten durch Chemilumineszenz mit dem MAST-CLA-Gerät von LUMINERY / Moderne Probleme der Allergologie, der klinischen Immunologie und der Immunpharmakologie: Materialien des Symposiums „Die neuesten Methoden zur Diagnose von Allergien“ 29. bis 31. Mai 2001 in Moskau. S. 13–17.
  3. Klinische Allergologie / Hrsg. R. M. Khaitova. M.: MEDpress-inform, 2002. 623 p.
  4. Luss L. V. Vergleichende Bewertung der diagnostischen Bedeutung verschiedener Methoden der spezifischen Allergiediagnostik bei Patienten mit atopischen Erkrankungen / Aktuelle Probleme der Allergologie, der klinischen Immunologie und der Immunopharmakologie: Materialien des Symposiums "Neueste Methoden der Allergiediagnose" 29. - 31. Mai 2001, Moskau. S. 7–8.
  5. Abuaf N., Rajoely B., Ghazouani E. et al. Bewertung der zytometrischen in vitro Basophilenaktivierung in vitro Aktivierung zur Diagnose einer Muskelrelaxans-Allergie // J. Allergie Clin. Immunol. 1999; 104: 411–418.
  6. Almqvist C., Pershagen G., Wickman C. M. Sozioökonomischer Status und Risiko für Asthma und Sensibilisierung nach vier Jahren in einer Geburtskohorte. Abstraktes Buch des XXIII. EAACI-Kongresses, 12. bis 16. Juni 2004, Amsterdam. Herausgeber: Roy Gerth van Wijk et al. 2004; 961: 283.
  7. De Weck A. L., Sanz M. L. Durchflußzytometrischer zellulärer Allergenstimulationstest. Technische und klinische Bewertung bei Allergien und Pseudoallergien // ACI International. 2002; 14: 5: 204–215.
  8. Emanius, G. E., Wickman C.M., Indoor Environment Comaciation. Abstraktes Buch des XXIII. EAACI-Kongresses, 12. bis 16. Juni 2004, Amsterdam. Herausgeber: Roy Gerth van Wijk bei al. 2004; 52: 22.
  9. Gamboa P. M., Sanz M. L., Garcia-Aviles C. et al. Durchflußzytometrischer zellulärer Allergenstimulationstest für allergische Patienten bei Allergiepatienten mit anti-negativem negativem Hauttest // Allergie. 2001; 56: 68: 5.
  10. Jahansson S. G. O., Bennich H. Immunologische Untersuchungen eines atypischen (Myeloms) Immunglobulins // Immunologie. 1967; 13: 381–394.
  11. Lashapelle J.M., Maibach H. I. Patch-Test und Pricktest. Eine praktische Anleitung. Mit einem Beitrag von J. Ring. Ed. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. 2003; 189.
  12. Sabbah A., Drouet M., Sainte-Laudy J. et al. Anwendungsbereich der Cytometrie und des Flusses in der diagnostischen Allergologie // Allergie. Immunol. 1995; 29: 15–21.
  13. Sanz, M. L., Gamboa, P. M., De Weck, A. L. Clinical Evaluation, ACI International. 2002; 14 (5): 185–193.
  14. Siraganian H.P. Histaminsekretion aus Mastzellen und Basophilen // Trends Pharmacol. Sci. 1983; 4: 432–437.
  15. Wedi B., Novacovic V., Koerner M., Kapp A. Chronisches Urtikaria-Serum induziert Histaminfreisetzung, Leukotrienproduktion und Basophil CD63 - eine hemmende Wirkung von entzündungshemmenden Medikamenten // J. Allergie Clin. Immunol. 2000; 105: 552–560.

TP Markova, MD, Professor
IPK Federal Biomedical Agency, Moskau

http://www.lvrach.ru/2006/04/4533741/

Muss auf Allergien testen

Hitachi Chemical Diagnostics, Inc. (HCD), war das erste Unternehmen, das einen multiplen allergischen Sorbent-Test (MAST) mit Chemilumineszenz-Analyse zur Bestimmung des spezifischen IgE-Spiegels entwickelte. Allergotest MAST hat zweifellos Vorteile gegenüber anderen Methoden der In-vitro-Allergiediagnostik. kleines Serumvolumen (0,75 ml), das die gleichzeitige Bestimmung von bis zu 36 Allergenen ermöglicht, Sicherheit und Zuverlässigkeit der Chemilumineszenz-Analysetechnologie, hohe Spezifität und Empfindlichkeit, Reproduktionsrate, eine Vielzahl von untersuchten Allergenen.

HCD-Produkte werden in medizinischen Einrichtungen in mehr als 40 Ländern der Welt erfolgreich eingesetzt und geben Ärzten Zugang zu den neuesten Technologien.

In Russland werden HCD-Produkte seit 1998 von Lumineri vertreten. Um eine diagnostische allergene Zusammensetzung von MAST-Panels zu erstellen, untersuchten führende Experten - Allergologen und Immunologen Russlands rund 14.000 klinische Fälle sorgfältig und wählten nur die für russische Zustände charakteristischen Allergene aus. RMAPO, führende Experten des Wissenschafts- und Forschungsinstituts für Pädiatrie des Gesundheitsministeriums der Russischen Föderation, des Zentralklinikspitals der UDP der Russischen Föderation, beteiligten sich an der Entwicklung.

HCD führt ständig innovative Technologien zur Herstellung von MAST-Allergietests ein und führt die neue OPTIGEN-Technologie auf MAST-Basis ein, die die neuesten wissenschaftlichen Fortschritte auf dem Gebiet der In-vitro-Allergiediagnostik verkörpert.

Hauptbestandteil der OPTIGEN-Technologie ist eine kleine Kunststoffprüfkammer, ein High-Tech-Gerät - das sogenannte Panel. Diese Platte besteht aus drei Komponenten: dem Körper der Platte, der Abdeckscheibe und der Trennwand. Das Deckglas besteht aus einzelnen Zellen mit sorbierten Allergenen an der Innenseite und optischen Linsen an der Außenseite, um den Lichtstrom zu verstärken und zu fokussieren.

Hauptbestandteil der OPTIGEN-Technologie ist eine kleine Kunststoffprüfkammer, ein High-Tech-Gerät - das sogenannte Panel. Diese Platte besteht aus drei Komponenten: dem Körper der Platte, der Abdeckscheibe und der Trennwand. Das Deckglas besteht aus einzelnen Zellen mit sorbierten Allergenen an der Innenseite und optischen Linsen an der Außenseite, um den Lichtstrom zu verstärken und zu fokussieren.

Das aus der Blutprobe des Patienten gewonnene Serum wird in die Testkammer des Panels gesaugt. Das Serumallergen IgE bindet an bestimmte Allergene, die innerhalb des Panelkörpers sorbiert werden. Als nächstes werden Reagenzien zu dem Panel hinzugefügt, die ein Lichtsignal mit variierender Intensität und abhängig von der Menge an allergenspezifischem IgE in der Patientenprobe erzeugen. Das Panel-Licht wird mit einem CLA-1-Luminometer gemessen. Die Ergebnisse werden automatisch auf dem eingebauten Drucker gedruckt.

Vorteile von mehreren Tests MAST OPTIGEN:

  • absolute Sicherheit für den Patienten und den Arzt;
  • die Möglichkeit der weit verbreiteten Anwendung in der Pädiatrie;
  • höchste Genauigkeit und Zuverlässigkeit des Ergebnisses aufgrund der Chemilumineszenz-Analysetechnologie;
  • ein Dreifachkontrollsystem (einschließlich einer Steuerkonsole zum Testen des Instruments, 2 Kontrollgewinden an jeder Steuerkonsole zur Beurteilung der Reagenzienqualität, Kontrollseren);
  • Bestimmung der minimalen Konzentrationen an spezifischem IgE (von 0,52 ng / ml oder 0,22 LU / ml);
  • die Fähigkeit, bei 5 Patienten in 8 Minuten bis zu 180 Allergene zu bestimmen;
  • Erhalt der Analyseergebnisse am Tag der Produktion;
  • die minimale Menge an Serum - von 300 μl;
  • Einfachheit, Leichtigkeit und Zuverlässigkeit bei der Handhabung (fehlende Matrizen, Reagenzgläser);
  • Komplettes Set von OPTIGEN-Panels mit allen notwendigen Reagenzien (Puffer, Lösungsmittelkonjugat, Photoreagenzien);
  • 1 Jahr Garantie auf das Gerät, die Möglichkeit der langfristigen Lagerung von OPTIGEN-Platten und Reagenzien;
  • vollautomatisches Studium von OPTIGEN-Panels im Luminometer CLA-1 mit Druckinformationen in praktischer Form;
  • völlige Unabhängigkeit von der Laborbasis. Das CLA-1-Gerät kann sowohl im Diagnoselabor als auch im Büro eines Facharztes leicht installiert werden: Allergologe, Lungenarzt, Kinderarzt, Augenarzt, Dermatologe, Gastroenterologe oder andere interessierte Spezialisten.
  • die Fähigkeit, einzelne Studien (ein Panel für einen Patienten) durchzuführen, ohne die Testkosten zu erhöhen;
  • hohe Systemzuverlässigkeit und keine Wiederholungsprüfungen erforderlich;
  • praktische Kombination von Allergenen in russischen OPTIGEN-Panels;
  • keine aufwendige Wartung des Geräts erforderlich, was für die Zeit nach der Garantie wichtig ist;
  • die Möglichkeit, das Gerät an einen Computer anzuschließen und ein Datenarchiv zu erstellen;

Die Zusammensetzung der Allergenplatten MAST OPTIGEN

OPTIGEN Russisch l

  1. Löwenzahn
  2. Wermut
  3. Quinoa
  4. Hasel (Pollen)
  5. Weiße Birke
  6. Schwarze Erle
  7. Aspergillius
  8. Cladosporium
  9. Kakerlakenmischung, die ich mische
  10. Hausstaub
  11. Timothy
  12. Wiesenschwingel
  13. Igel-Team
  14. Roggen (Pollen)
  15. Hühnchen
  16. Mais (Essen)
  17. Ein apfel
  18. Erdbeeren
  19. Weizen (Essen)
  20. Kartoffeln
  21. Karotte
  22. Cod
  23. Rindfleisch
  24. Schweinefleisch
  25. Tomate
  26. Ganzes Ei
  27. Milch
  28. Haselnuss (Lebensmittel)
  29. Soja
  30. Erbse
  31. Hühnerfeder
  32. Hund (Epid.)
  33. Pferd (Epid.)
  34. Katze (Epid.)
  35. Mite Farina
  36. Mite Pteronissinus

OPTIGEN Russisch IV

  1. Löwenzahn
  2. Wermut
  3. Quinoa
  4. Weiße Birke
  5. Schwarze Erle
  6. Alternaria
  7. Candida
  8. Mukor
  9. Aspergillius
  10. Cladosporium
  11. Penicillium
  12. Kakerlakenmischung, die ich mische
  13. Hausstaub
  14. Timothy
  15. Wiesenschwingel
  16. Roggen (Pollen)
  17. Hühnchen
  18. Hafer
  19. Ein apfel
  20. Erdbeeren
  21. Weizen (Essen)
  22. Kartoffeln
  23. Karotte
  24. Cod
  25. Rindfleisch
  26. Schweinefleisch
  27. Tomate
  28. Ganzes Ei
  29. Milch
  30. Haselnuss (Lebensmittel)
  31. Soja
  32. Hühnerfeder
  33. Hund (Epid.)
  34. Katze (Epid.)
  35. Mite Farina
  36. Mite Pteronissinus

OPTIGEN Inhalation

  1. Erle
  2. Hasel (Pollen)
  3. Weiße Birke
  4. Wermut
  5. Timothy
  6. Roggen (Pollen)
  7. Wegerich
  8. Esche
  9. Penicillium
  10. Alternaria
  11. Cladosporium Aspergillus
  12. Hamster (Epid.)
  13. Meerschweinchen (Epid.)
  14. Kaninchen (Epid.)
  15. Pferd (Epid.)
  16. Katze (Epid.)
  17. Hund (Epid.)
  18. Tick, Farina
  19. Mite, Pteronissinus

OPTIGEN Essen

  1. Krabbe
  2. Cod
  3. Karotte
  4. Ein apfel
  5. Kartoffeln
  6. Tomate
  7. Sellerie
  8. Pfirsich
  9. Walnuss
  10. Erdnüsse
  11. Haselnuss
  12. Mandel
  13. Soja
  14. Roggen
  15. Weizen
  16. Sesam
  17. Kasein
  18. Milch
  19. Eiweiß
  20. Eigelb

OPTIGEN Atopisch

  1. Mite, Pteronissinus
  2. Tick, Farina
  3. Aspergillius
  4. Cladosporium
  5. Pferd (Epid.)
  6. Hund (Epid.)
  7. Katze (Epid.)
  8. Timothy
  9. Wermut
  10. Weiße Birke
  11. Hasel (Pollen)
  12. Eiweiß
  13. Milch
  14. Cod
  15. Weizen
  16. Soja
  17. Erdnüsse
  18. Ein apfel
  19. Karotte
  20. Latex
http://www.luminery.ru/%D0%B0%D0%BB%D0%BB%D0%B5%D1%80%D0%B3%D0%BE0% D0%BB%D0%BE%D0%B3 % D0% B8% D1% 8F /
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